产品介绍
细胞冻存
0、概要
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。
一、细胞冻存原理
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
二、低温冻存细胞步骤
1.用于冻存的细胞必须是健康无污染的，并且在冻存之前必须在对数生长期生长几天。
2.培养贴壁细胞到对数生长期的末期，胰酶消化后离心。如果冻存的是悬浮细胞，则只要离心即可。
3.用无菌的含血清的、同时含有10%（v/v）二甲亚砜（DMSO）的培养基重悬细胞。操作一定要快，尽量减少细胞暴露在液体DMSO中的时间。要使用最高纯度的DMSO，最好是使用之前未开封或长期暴露于光线下的DMSO。
4.将适当体积和数量的细胞加入冻存管──通常一毫升的冻存管加入2×105至 5×106个细胞。可以使用塑料或玻璃的冻存管。但是外部有硅树脂密封的塑料冻存管在高于液氮温度下使用效果最好（如液氮的蒸汽相）。浸没到液氮的液相中会导致液氮进入冻存管，在化冻过程中可能导致冻存管内容物喷出。如果储存在液氮中，则内部带有O形密封环的塑料冻存管效果更好。玻璃冻存管由于其安全密封和其内容物化冻快速的特点，能够保证较高的细胞活力，在使用时效果最好。但是由于它们在使用时需要火焰密封而显得不够方便。
5.将冻存管放在能够控制降温速率的冷冻器中，以1℃/分钟的速度进行冷却。如果没有可控降温速率的冷冻器，还可以通过以下的方法获得满意的结果：
a.将冻存管放在一个1英寸厚的泡沫塑料绝热盒子中，然后于-70℃放置12小时。
b.在液氮罐中用液氮的蒸汽相冷却冻存管。
c.把冻存管放在盛满异丙醇的容器中，然后放入-70℃冰箱。
d.直接把冻存管在-20°C放几个小时，然后转移到-70°C进一步冷却。
e.直接把冻存管放入-70°C冰箱。最后两种方法（d和e）不是很理想，因为细胞活力会受到影响，一些敏感的细胞种群可能会丢失。这些方法只有在没有其他选择的时候才可以采用。
6.冷冻之后，冻存管应该转移到充满液氮的容器中。在-135°C以上保存过长的时间会降低细胞的活力。
三、细胞冻存容器——冻存管
1、无菌冻存管
采用无菌技术的外部螺纹管瓶。基本设计与NALGENE瓶和细口大瓶使用的无衬垫盖相似——密封环结合特别设计的螺纹。管体印有白色标记区、注满线和刻度。已辐射消毒，无细胞毒素且无热原。符合“危险物品管理条例”，可用于传染性和诊断样本的运送。自立式设计。每袋25个。（编号5000-0050的产品每袋包装10个。）现在还提供带条形码的产品（参见编号为5001的系列产品）。
本产品符合1998年10月27日欧盟议会和委员会签署的关于体外诊断医疗设备的Directive 98/79/EC。
编号 5000 -0012 -0020 -0050
容量，ml 1.2 2.0 5.0
外径，mm 13.5 13.5 13.5
外径，in. 1/2 1/2 1/2
高度，mm 38.1 48.3 92
高度，in. 1-1/2 1-7/8 3-1/2
每箱数量 500 500 250
2、无菌样本冻存管（带螺旋盖，15ml）
专为存储固体样本而设计。仅用于机械冷冻装置。广口无肩设计，便于镊子伸入管内进行取样操作。管盖无衬垫。已通过认证，无细胞毒素且无热原。
本产品符合1998年10月27日欧盟议会和委员会签署的关于体外诊断医疗设备的Directive 98/79/EC。
编号 5005 -0015
容量，ml 15
外径，mm 33
外径，in. 1-5/16
带盖高度，mm 47
带盖高度，in. 1-13/16
每箱数量 75
3、无菌SYSTEM100™冻存管
NALGENE System 100冻存器具的冻存箱有81个以上的孔，增加了23%的存储能力，从而为您节省了宝贵的资金和冷冻空间。本系统包含两种尺寸的带垫圈的管瓶，离心速度可达8,000 x g。其中一个存储箱可容纳100个管瓶（编号5026-1010）。另一个25孔管瓶架（编号5030-0505）带有增大空间的圆孔，便于管瓶的存取。
System 100是唯一可在100孔冻存箱中存储外螺纹管瓶的系统。
创新设计的管瓶增加了机械和气相（LN2）冷冻装置的存储能力。带垫圈的瓶盖可在微量离心处理（达8,000 x g）和运送期间确保防漏。采用无菌技术的外部螺纹管瓶。管体印有白色标记区，注满线和刻度。可辐射杀菌。无细胞毒素且无热原。符合“危险物品管理条例”，可用于传染性和诊断样本的运送。自立式设计。每袋25个。1.5ml的产品现带有条形码（5001-1020）。
本产品符合1998年10月27日欧盟议会和委员会签署的关于体外诊断医疗设备的Directive 98/79/EC。
小心：不要以8000xg以上的速度对SYSTEM 100冻存管进行离心处理。以超过建议的速度对这些管瓶处理将会导致故障，还可能丢失样品。在转子中适当平稳冻存管。检查在转子中是否安装正确。以特定速度用水进行测试运行，以确保正常工作。
编号 5000 -1012 -1020
容量，ml 1.0 1.5
外径，mm 12 12
外径，in. 15/32 15/32
高度，mm 38 48
高度，in. 1-1/2 1-7/8
每箱数量 500 500
四、细胞冻存管容器——冻存盒和冻存支架
1、SYSTEM 100™冻存盒
专为超低温存储而设计，可存储100个SYSTEM 100冻存管（编号5000-1012、-1020和5001-1020）或其他相近大小的外螺纹管瓶，以及多数内螺纹管瓶。冻存盒可容纳81个以上的管瓶，冷冻存储能力增加了23%。温度范围在-196°C至+121°C之间。透明盖上印有为库存目的而设计的网格，可观察管内物质，关键是为避免操作不当。
编号 5026 -1010
阵列 10 x 10
L x W x H，mm 133 x 133 x 52
L x W x H，in. 5-1/4 x 5-1/4 x 2-1/16
每箱数量 10
2、CryoBoxes™冻存盒（可容纳25和81个管瓶）
用于超低温存储内螺纹和外螺纹的1.2、2.0和5.0ml冻存管。经久耐用，与易破的纸板相比是经济的选择。温度范围在-196°C至+121°C之间。透明盖上印有为库存目的而设计的网格，可观察管内物质，关键是为避免操作不当。可使用专为超低温设计的记号笔，如NALGENE冻存器具记号笔，编号为6313。独特的5 x 5排列方式适用于1.2/2.0ml的冻存管。在大的机械冷冻装置中建立小而充分利用空间的存储系统。对冻存管而言，就像坚固且可重复用的邮箱。
编号 5025-0505 5026-0909 5027-0909
阵列 5 x 5 9 x 9 9 x 9
容纳管瓶尺寸，ml 1.2和2.0 1.2和2.0 5.0
L x H x W，mm 76x76x52 133x133x52 133x133x 95
L x H x W，in. 3x3x2 5-1/4x5-1/4x2 5-1/4x5-1/4x3-3/4
每盒数量 8 4 4
每箱数量 48 24 24
3、存储盒
坚固耐用，带有透明盒盖，可用于在存储区、冰箱以及机械冷冻装置（-196°C至+121°C）中存储各种不同大小的管瓶、瓶和袋。请确保检查所有存储物质的耐温性。
编号 5050 -0001
L x W x H，mm 133 x 133 x 52
L x W x H，in. 5-1/4 x 5-1/4 x 2
每盒数量 4
每箱数量 24
4、彩色冻存管盒
主要特点：
提供五种栅格颜色，以便易于识别库存管理
可放置 1 到 2 mL 的低温存储样品瓶（以 9 x 9 阵列）
最多可存储 81 个低温样品
适用温度范围为 -196° 到 +121°C
透明盖使内容物一目了然
盖带有编号的栅格，便于快速识别样品
由结实的聚碳酸酯材料制成，适用于超低温存储
混合包含有红、黄、绿、蓝、灰、白六种颜色各四盒
可高压灭菌
5、25孔冻存管支架
蓝色聚碳酸酯
可高温高压灭菌
可进行单手操作。每个孔都可与管瓶基部形成良好的互锁。与编号为5030-0510的产品相比，每孔间距更大，易于管瓶的取放。孔呈交错状排列，易于观察管内物质。除编号为5005-0015的产品外，可用于放置所有的NALGENE冻存管。
编号 5030 -0505
L x W x H，mm 197 x 102 x 22
L x W x H，in. 7-3/4 x 4 x 7/8
可容纳冻存管数 25
每盒数量 1
每箱数量 4
6、50孔冻存管支架
白色聚碳酸酯
可高温高压灭菌
可进行单手操作。每个孔都可与管瓶基部形成良好的互锁。最多可以5 x 10的排列方式容纳50个管瓶。除编号为5005-0015的产品外，可用于放置所有的NALGENE冻存管。
编号 5030 -0510
L x W x H，mm 197 x 102 x 28
L x W x H，in. 7-7/8 x 4-1/8 x 1
每盒数量 1
每箱数量 4
五、Mr. Frosty 冷冻容器
Mr. Frosty 冷冻容器提供可重复的 -1°C/分钟的冷却速率，能够成功进行低温冻存和恢复。
适用于多种低温管和样品瓶，可提供低成本的细胞低温冻存和恢复。
主要特点：
坚硬的样品瓶支架可将样品瓶与酒精隔开，以防样品被灯芯污染
仅需要 100% 异丙醇和一个 -70°C 机械冷冻机
贴有按步骤的图形说明标签
最多可放置 18 个样品瓶
提示：容器有一个直径为 4.75英寸 (120 mm) 的隔垫
所需附件：异丙醇和机械冷冻机
六、冷冻盒——冰盒
1、Quick Chill™装置
聚碳酸酯 无毒绝缘溶液，带手柄
能够迅速冷藏分子生物应用领域（如DNA/RNA样本的酒精沉淀）中使用的生物样本，并且可以重复进行。该快速冷藏设备最高可在45分钟内重复使用，从而消除了使用干冰/酒精槽的不便。具有聚碳酸酯材料和预填充的无毒绝缘溶液，经久耐用。可容纳12个0.2到1.5ml的微量离心管。离心管和绝缘溶液不直接接触，从而保证管上的标签和标记不会脱落。抗裂、可叠放式设计。橡胶腿设计，可防止“快速冷藏”装置在工作台表面滑动。
带有微量离心管时的性能：
样品，容量 到达下列温度所需时间*-
20℃（IPA**）或0℃（水）
水，1.5ml 3.2分钟
水，0.5ml 4.0分钟
IPA，1.5ml 2.0分钟
IPA，0.5ml 2.8分钟
*装置在室温下
**异丙醇
编号 DS5114 -0012
包含衬垫数 16
管阵列 3 x 4
L x W x H，mm 151 x 108 x 125
L x W x H，in. 5-5/16 x 4-1/4 x 4-15/16
重量，lb. 1-1/2
重量，kg 0.68
每箱数量 1
2、-20℃实验室专用冷却盒
蓝色聚碳酸酯较低的部分填充无毒胶体；
聚碳酸酯盖，已填充胶体为白色，为填充胶体为透明；
带手柄
-0032的产品能在2小时内保持-15℃以下的温度；而-0012的产品则能在1小时内保持温度。此冷却盒可容纳0.2到2.0ml的微量离心管和冻存管。包括16个衬垫，可形成1.5ml的孔洞，用来放置0.2或0.5ml的管。
编号 5115 -0012 -0032
盖类型/颜色 未填充/透明 已填充/白色
管阵列 3 x 4 4 x 8
L x W x H，mm 151 x 108 x 125 243 x 157 x 146
L x W x H，in. 5-5/16x4-1/4x4-15/16 9-9/16x6-3/16x5-3/4
重量，lb. 1-1/2 4-1/2
重量，kg 0.68 2.04
每箱数量 1 1
3、0℃实验专用冷却盒和试管冷却盒——0℃冷却盒
绿色聚碳酸酯较低的部分填充无毒胶体；
聚碳酸酯盖，已填充胶体为白色，未填充胶体为透明；
带手柄
0℃冷却盒可代替杂乱的冰槽。-0032的产品能在5小时内保持1℃以下的温度；而-0012的产品则能在3-1/2小时内保持温度。每个冷却盒都配有16个衬垫，可形成1.5ml的孔洞，用来放置0.2或0.5ml的微量离心管。DS5116-0012和-0032的产品可容纳冻存管和0.2到2.0ml的微量离心管。
编号 DS5116 -0012 -0032
盖类型/颜色 未填充/透明 已填充/白色
管阵列 3 x 4 4 x 8
L x W x H，mm 151 x 108 x 125 243 x 157 x 146
L x W x H，in. 5-5/16x4-1/4x4-15/16 9-9/16x6-3/16x5-3/4
重量，lb. 1-1/2 4-1/2
重量，kg 0.68 2.04
每箱数量 1 1
七、水平冻存盒架
水平架可适合大多数直立冷冻装置的隔间。两侧手柄可用于左手门或右手门的冷冻装置。
编号 5038 -4322
隔板数 12
阵列 4 x 3
可容纳NALGENE冻存盒编号 5026-0909，5026-1010，5050-0001，5055-5002，5055-5005，5055-5015，867013系列
H x W x D，cm 22.5 x 14.3 x 44.4
H x W x D，in. 8-7/8 x 5-5/8 x 17-1/2
每盒数量 1
每盒数量 2
八、冻存管配件
1、真空绝热瓶
高密度聚乙烯 高密度聚乙烯盖 聚乙烯涂层手柄
防碎设计，用于短期存储冰水，干冰溶剂和液态氮。具有耐化学性的HDPE双层罐壁中由无CFC聚氨酯泡沫填充，可以承受从-196℃到+100℃的温度。可通气的绝缘盖。所有尺寸的产品都带有模制凸纹、盖固定翼片、倾倒口和底部手柄区，可提高安全性。吊环式把手方便实用。
编号 4150 -1000 -2000 -4000 -9000
容量，L 1 2 4 10
口部内径，mm 96 122 158 198
口部内径，in. 3.8 4.8 6.2 7.8
内部深度，mm 195 231 295 396
内部深度，in. 7.7 9.1 11.6 15.6
总高度，mm 251 282 353 470
总高度，in. 9.9 11.1 13.9 18.5
每盒数量 1 1 1 -
每箱数量 4 2 2 1
2、CryoCane™冻存条（铝材料）
编号为5015-0001的产品可容纳5个管瓶。而编号为5015-0002的产品则可以容纳6个管瓶。通过冻存条标记器来识别冻存条（编号5020）。NALGENE冻存套（编号5016）可在操作和存储过程中保护冻存条和冻存管。
编号 5015 -0001 -0002
适用NALGENE冻存器具管容量，ml 1.0、1.2、1.5和2.0 1.0、1.2、1.5、2.0和5.0
长度，mm 290 300
长度，in. 11-5/16 11-13/16
每盒数量 12 12
每箱数量 48 48
3、CryoSleeve™冻存套
聚氯乙烯
在操作和存储时，透明的塑料套将NALGENE冻存条封存在内，进一步确保了安全性，它是纸套的直接代替产品。无需取下套子即可迅速找到冻存条中的闲置空间，并可轻松识别特定冻存管。冷冻后不会变脆。
目录编号 5016 -0001
长度，mm 273
长度，in. 10-13/16
每箱数量 100
4、冻存器具标签
专为在超低温度下的使用而设计。这是一种布标签，可黏附于塑料和纸板冻存存储箱上。不会脱落或收缩。可是用圆珠笔进行书写。共10页。每页20个标签。不能使用打印机。
目录编号 5040 -0002
标签尺寸，mm 25 x 50
标签尺寸，in. 1x 2
每盒数量 200
每箱数量 2000
5、冻存器具记号笔
专为在纸板和聚碳酸酯上做标记而设计。在超低温下墨水也不会褪色。具有防污功能。包装内含四支超细笔。
目录编号 6313 -0010 -0020
颜色 红色、绿色、蓝色、
黑色各一支 仅黑色
每盒数量 4 4
每箱数量 24 24
九、附加
冻存细胞的复苏
1.把冻存管在37°C水浴进行解冻，其间不停地温和摇动，直到冻存管内看不到结冰。
2.冻存管在水浴中继续孵育30秒，同时温和地摇动。
3.立即用70%的乙醇消毒。
4.在超净台内打开冻存管，把内容物转移到无菌的15毫升离心管中。
注意：如果是玻璃冻存管解冻，用无菌的纱布裹住消过毒的冻存管，然后用力掰断已有刻痕的瓶颈。
5.加入1.5毫升在37°C预热的含血清培养基。
6.静置5分钟。
7.加入3毫升预热的培养基再静置5分钟。
8.加入6毫升预热的培养基静置5分钟。
9. 200×g离心细胞悬液10分钟。
10.弃上清，再用25毫升的培养基温和重悬细胞沉淀，之后转移至75cm2的培养瓶中。
11.用显微镜观察细胞，估计细胞的存活率，然后把它们放入培养箱。
12.在培养箱中孵育过夜后，再次观察细胞并估计细胞存活率。如果需要更准确的检测，则采用台盼蓝排除染色的方法。
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