LightShift EMSA试剂盒与基于地高辛的EMSA试剂盒及放射性方法的比较。A)灵敏度比较。将标记的DNA双链进行连续稀释,使用6%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,并按照操作手册指导进行检测。使用LightShift EMSA试剂盒与放射性法(2000cpm32P/femtomole)可获得相似的灵敏度(<50 attomoles),尽管32P标记的DNA明显需要更长的曝光时间。使用两种化学发光试剂盒进行相同时间的曝光,结果显示LightShift EMSA试剂盒的灵敏度大约是地高辛试剂盒的八倍。B)EMSA表现。将含有转录因子Oct-1结合序列的22bp双链进行标记,用于LightShift EMSA试剂盒和基于地高辛的EMSA试剂盒检测,或使用T4多核苷酸激酶(40000cpm/反应)进行32P标记用于传统的放射性EMSA检测。结合反应的条件均一化为20fmol双链与6.8μg HeLa细胞NE-PER核提取物(图示处)孵育。化学发光试剂盒按照操作手册指导使用。对于放射性EMSA,凝胶直接曝光于X光胶片。
参考文献
Cornelussen, R.N.M.,et al. (2001). J. Mol. Cell Cardiol.33, 1447-1454.
Ishida, A., et al. (2002). J. Biol. Chem.277(29), 26217-26224.
MacLachlan, T.K. and El-Deiry, W.S. (2002). Proc. Natl. Acad. Sci. USA99(14),9492-9497.
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Tarumi, T., et al. (2002). J. Biol. Chem.277(21), 18510-18516.
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20148
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LightShift 化学发光EMSA试剂盒
足够用于100个结合反应和检测800cm2膜的试剂
包括:10×结合缓冲液
生物素-EBNA对照DNA
未标记的ENBA DNA
ENBA提取物
Poly(dI•dC)
50%甘油
1%NP-40
1M 氯化钾
100mM氯化镁
200mM EDTA,pH8.0
5×上样缓冲液
稳定的辣根过氧化物酶标记的链亲和素
鲁米诺/增强溶液
稳定的过氧化物溶液
封闭缓冲液
4×洗涤缓冲液
底物平衡缓冲液
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试剂盒
1ml
50μl
50μl
125μl
125?μl
500μl
500μl
1ml
500μl
500μl
1ml
1.5ml
80ml
80ml
500ml
500ml
500ml
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