产品介绍
黄曲霉M1检测试剂盒
适用
Beacon黄曲霉M1检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测样品中的黄曲霉M1。
检测原理
Beacon黄曲霉M1检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。黄曲霉毒素M1的样品提取液和标准加入到测试孔中进行反应。在30分钟的孵化后加入黄曲霉毒素M1的酶标记物，孵育15分钟。在此孵育之后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未结合的黄曲霉M1和酶标记物。加入无色的底物溶液，孵育30分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，将未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的黄曲霉M1的浓度。
特异性
Beacon黄曲霉M1检测试剂盒对于黄曲霉M1及其结构类似物具有的特异性，以下表格显示了交叉反应率。
Aflatoxin M1 | 100% |
Aflatoxin M2 | 9.1% |
检测限：3ppt
定量限：20ppt
试剂及材料
若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。
1． 真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板。
2． 6瓶2ml浓度为0，1.5，3，10，30，100ng/l（ppt）的黄曲霉M1标准品。
3． 1瓶12ml的酶标记物。
4． 1瓶50ml 10倍清洗液
5． 1瓶14ml的底物溶液
6． 1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
7． 说明书
注意事项
1． 每种试剂最适用于Beacon 黄曲霉M1试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2． 试剂的稀释及污染以及程序中未提及的样品，均会导致结果失真。
3． 不可使用过期试剂。
4． 开始实验前试剂回温到室温（20-28℃）,避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5． 黄曲霉M1为有毒物质，需要小心处理。
6． 停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有喷洒，立即用大量水冲洗。
所需材料（不提供）
1． 实验室用蒸馏水或去离子水
2． 量筒
3． 用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
4． 可吸取50ul容量的移液器及一次性吸头
5． 可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸头
6． 吸水纸
7． 450nm的酶标仪
8． 计时器
9． 洗瓶
样品处理：
牛奶样品（稀释倍数:1）
1. 取牛奶样品，用冷冻离心机（3000g ，10℃）离心10分钟去除脂肪（没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）
2. 离心后取下层脱脂牛奶用于检测（每孔100μl）
奶粉样品(稀释倍数：10)
1. 用天平称取10g奶粉到容量瓶加去离子水到100ml。（还原牛奶）
2. 震荡5分钟，使充分溶解。
3. 用冷冻离心机（3000g ，10℃）离心10分钟
4. 离心后取下层脱脂奶用于检测（每孔100μl）
检测程序（注意标准及样品做重复，可以提高检测的准确度及精确度）
1． 开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温，准备洗液：把10倍的洗液加入450ml水。
2． 取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3． 加入100ul的样品溶液及标准液到对应的微孔中。（确保使用一次性干净吸头）
4． 轻轻混合30s，室温下孵育30分钟
5． 不要洗板，加入100ul的酶标记物至每个微孔中。
6． 轻轻混合30s，室温下孵育15分钟。
7． 倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后倒掉，重复3次，共4次洗板。
8． 最后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
9． 每孔中加入100ul的底物溶液。
10． 室温下孵育30分钟。
11． 每孔中加入100ul停止液。
12． 450nm读吸光度值。
结果判断
1． 半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉M1含量大于此标准的黄曲霉M1的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉M1含量小于此标准的黄曲霉M1的浓度。
2． 定量结果判定，需要以标准的吸光率为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光率的点用直线连接，根据样品的吸光率在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光率大于最小标准的吸光率或小于最大标准的吸光率，即可说明此样品中黄曲霉M1的含量小于1.5ppt或大于100ppt。
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