产品介绍
特点
? 采用位点特异性重组技构建，使可能有相互作用的蛋白的下游表达和分析比以前更加方便
? 通过使用三种报告基因和低拷贝数的载体，ProQuest?系统可以得出最低假阳性的可信结果。
? 使用基于GAL4转录因子重建系统确定相互作用
原理
酵母双杂交技术产生以来，它主要应用在以下几方面：(1）检验一对功能已知蛋白间的相互作用。(2）研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。(3)用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。(4)分析新基因的生物学功能，即以功能未知的新基因去筛选文库。
ProQuest?系统依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到'诱饵'载体，pDEST? 32，并和GAL4蛋白的DNA结合域（DBD）表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到'猎物'载体，pDEST? 22，同GAL4的转录激活域（AD）表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达
服务流程
1) 提取总RNA，分离mRNA，反转录cDNA。
2) 将cDNA与pDONR222载体进行BP重组反应，重组产物转化DH10B感受态细胞。
3) 甘油保存大肠杆菌文库。
4) 提取大肠杆菌文库质粒DNA，制备酵母感受态细胞
5) 大肠杆菌文库质粒DNA转化酵母菌，测定转化效率，
6) 收集酵母转化子，测定文库效价。
7) 甘油保存酵母菌文库。
客户提供
提供保质保量的组织（5g）或者细胞株（1×107细胞）
我们提供
大肠杆菌cDNA文库（甘油保存），酵母菌cDNA文库（甘油保存）
质量保证
? 初级文库验收标准：库容量1×107；平均插入片段1.2 kb；重组率87%
? 酵母菌文库库容量：1×106
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