产品介绍
使用说明书
名称：Taq DNA polymerase
包装量：500U
浓度：5U/ul
10 X Reaction buffer（Mg2+ free） : 2ml
25mM MgCl2: 1ml
保存温度：-20℃
制品说明：本制品是94KDa的耐热性Taq DNA聚合酶（简称Taq酶）。基因来源为Thermus aquaticus DNA polymerase，将其克隆到大肠杆菌中进行表达后，分离提取而得到的。其具有与天然Taq DNA聚合酶相同的功能。Taq酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。Taq酶不具有3’到5’的外切酶活性。
活性定义：用活化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃下，30分钟内，将10nmol的全核苷酸转化为酸性不溶物的活性所需要酶量为1个活性单位。
纯度：
1） SDS-PAGE电泳纯度：将50U酶行SDS-PAGE电泳，经考马斯亮蓝染色，其纯度大于90%。
2） 核酸酶
1：将10U的酶与1ug λ DNA 在50ul反应体系中，25℃反应8小时，45℃反应4个小时，74℃反应4个小时，经琼脂糖电泳，电泳条带不发生变化。
2：将10U的酶与1ugλDNA/Hind III 在50ul反应体系中，25℃反应8个小时，45℃反应4个小时，74℃反应4个小时，经琼脂糖电泳，电泳条带不发生变化.
3：将10U的酶与1ug 超螺旋质粒pGEM3Zf在50 ul反应体系中，25℃反应8个小时，45℃反应4个小时，74℃反应4个小时，经琼脂糖电泳，电泳条带不发生变化.
用途：
1） PCR法扩增DNA
2） DNA标记
3） 测序
PCR反应性能：
1） 以λDNA为模板，可以很好地扩增8Kbp的DNA片段。
2） 以人基因组DNA为模板，可很好的扩增2.9Kbp的DNA片段。
3） 以人基因组DNA为模板，可在反应体系中目的基因为100拷贝的情况，扩增出目的片段。
4） PCR产物带有3’A，可以直接用于基于T载体的PCR片断克隆。
以λDNA为模板进行PCR扩增反应
1. 按下列组份配制PCR反应液(50ul反应体系)。
|
Ensure Taq
|
0.25ul
|
|
10 X buffer (without Mg2+)
|
5ul
|
|
25mM MgCl2*1
|
3ul
|
|
dNTP mixture(each 10mM)
|
1ul
|
|
Template DNA(λDNA)*2
|
2.5ng
|
|
Forward Primer(20uM)
|
1ul
|
|
Reverse Primer(20uM)
|
1ul
|
|
Water (nuclease free)
|
Up to 50ul
|
Ensure Taq 0.25ul
10X Reaction buffer (Mg2+ free) 5ul
25mM MgCl2 3ul
dNTP mixture (each 10mM) 1ul
Tepmplate DNA (lambda DNA) 2.5ng
Forward Primer 1ul
Reverse Primer 1ul
Water (nuclease free) Up to 50ul
*1 MgCl2的不同浓度会影响PCR的反应性能，一般情况下MgCl2的终浓度在在1.0-2.5mM之间，推荐的初次使用浓度为1.5mM.
*2 50ulPCR反应体系中模板DNA推荐加入量
|
人基因组DNA
|
0.1ug-1ug
|
|
大肠杆菌基因组DNA
|
10ng-100ng
|
|
λDNA
|
0.5ng-5ng
|
|
质粒DNA
|
0.1ng-10ng
|
2 .PCR反应条件的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。
3 .通常情况下，每Kbp产物的延伸时间为1分钟。如PCR产物的长度为1Kbp，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kbp，则延伸时间可以设置为2分钟。
来宝会员