来宝网 2017/8/11点击1426次
在单克隆抗体(McAb)研制中，细胞杂交获得成功后，常需对有价值的阳性孔进行克隆化，扩大培养，同时也需要及时冻存原始孔的杂交瘤细胞和每次克隆化得到的亚克隆细胞。因为在没有建立一个稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能发生细胞的污染、细胞突变、分泌抗体能力的丧失等等。如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而全功尽弃。因此，杂交瘤细胞的冻存一直是单克隆抗体研制中重要环节之一。
传统杂交瘤细胞冻存方法如下
1. 将初筛、复筛验证阳性的96孔板单克隆细胞培养至少50%汇合度，然后转种至每孔加有500μl培养基的48孔板中继续培养，每个单克隆细胞至少转种3个48孔板上的培养孔，直至细胞汇合度达到约90%。
2. 完全吸去48孔板细胞培养孔中的培养基，加入含有血清和二甲基亚砜的新鲜培养基重悬杂交瘤细胞，调整细胞浓度至1x106/ml，按照每管1x106个细胞分装细胞至细胞专用冻存管，通常3个48孔板上的培养孔细胞可以合并得到1x106个细胞。
3. 以一定的缓慢速度下降温度（可用程序降温仪控制：0℃～-20℃，下降1℃/min；-20℃～-40℃下降2℃/min），然后将冻存管细胞于-196℃液氮或液氮蒸气中长期保存。
可见，传统方法冻存杂交瘤细胞非常繁琐：1. 需现用现配冻存液；2. 因传统冻存液不能原位冻存细胞，且必须液氮冻存，所以只能将培养孔中的细胞分装至细胞专用冻存管冻存；3. 需程序降温；4. 需冻存于液氮中。
必拓生物自主研发的“无血清快速细胞冻存液”，可作为杂交瘤细胞专用细胞冻存液。使用“无血清快速细胞冻存液”采用96孔板-80℃整板冻存不同种类的杂交瘤细胞12个月，复苏后细胞存活率均达90%以上。其优点：1. 即用型，无需添加任何成份，直接冻存细胞；2. 可整板冻存(原位冻存)，只需直接弃去培养液，加入适量快速冻存液，封闭培养板边缘，再置于-80℃冰箱即可；3. 无需程序降温；4. 可-80℃冰箱冻存或液氮冻存。
无血清细胞冻存液快速冻存方式如下
1. 从培养状态良好的细胞培养板(如96孔、48孔、6孔、平皿等)中将培养基上清小心吸取干净。
2. 加入适量无血清快速细胞冻存液于培养孔板中，充分浸润细胞。
3. 盖上盖板，做好密封措施，防止染菌。
4. 直接将含冻存液的细胞培养板放入-80℃以下冰箱，长期冷冻保存。
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