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问：必拓生物提供一系列常用菌种，那么，菌种以什么形态提供给客户更好呢？

答：一般菌种保存形态是甘油菌。但甘油保存菌容易污染，运输也不方便，因此，我们在给客户寄送菌种时，提倡寄送穿刺培养菌。因为穿刺菌在4℃下可保存数个月，并且不容易污染，便于运送。（注：夏天运输时一定要用冰盒冰袋）

问：如何制作穿刺菌？

答：制作穿刺菌时，可在1.5ml的Tube管中加入琼脂培养基（半固体），把菌体用牙签穿刺于琼脂培养基中，37℃ 培养一个晚上后便可使用。

问：客户收到穿刺菌后该如何储存？  

答：如短期保存（1个月内），可直接置于4℃保存；如长期保存，建议从穿刺菌划线后，挑取单菌落，接种在液体培养基中，做成甘油菌，置于-80℃保存。如需备份，也需要重新制备甘油菌，-80℃保存。

问：如何做甘油菌？

从菌种平板挑取单菌落，接种至液体培养基（按需要加入抗生素）中，培养过夜或培养至对数中期，取适量菌液于小管中，加入终浓度为10%-20%的灭菌甘油，混匀后可直接置于-80℃保存。

问：如何从穿刺菌中复苏细菌？

答：穿刺菌来源于单菌落，建议客户收到穿刺菌后，请先在LB平板上划线，然后挑取一个新鲜的单菌落于LB液体培养基中进行培养即可。

具体操作如下：取一个干净的移液器枪头，沿着穿刺管中淡黄色的大肠杆菌生长线插入，来回反复操作几次，每次都轻微改变枪头的方向，以尽可能的增加枪头与菌的接触面。将沾了菌的枪头在的LB平板上划线。将平板置于37℃培养箱中过夜培养。次日从LB平板上挑取一个单菌落接种到LB液体培养基中，37℃摇床过夜培养。

注：如果是含有载体的穿刺菌，则需用含有相应抗生素（载体的抗性基因）的LB平板和液体培养基，复苏菌种后直接提质粒即可。

附：抗生素使用浓度

氨苄青霉素(Ampicillin)：100 μg/ml

卡那霉素(Kanamycin)：50 μg/ml

氯霉素(Chloramphenicol)：17-34 μg/ml

四环素(Tetracycline)：5-12.5 μg/ml

链霉素(Streptomycin)：50 μg/ml

(根据质粒拷贝数的高低，抗生素使用浓度可以适当调整 )

问：是否可以直接将穿刺菌接种到LB液体培养基中培养复苏菌种？

答：虽然穿刺菌中的大多数细菌细胞在遗传上应该是相同的，但是偶然情况下，会存在个别隐藏的突变细菌。如果您只是简单的从混合菌落中挑选了一团细菌，然后在液体培养基中培养，那么突变的细菌就有可能会接管整个培养物，从而影响您的实验。而每个单独的菌落就是单克隆，即它们在遗传学上是相同的因此通过划线挑取单克隆的方法可以很好的避免这种问题。