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银耳提取物抗抑郁活性研究-上海欣软

摘要:目的研究银耳提取物对大鼠抗抑郁活性的影响·方法采用雄性Wistar大鼠(体重180 - 220 g)建立慢性应激抑郁症大鼠模型，建模成功大鼠随机分为4组，分别为模型组(生理盐水2.0 ml/kg)，银耳提取物低剂量组((0. 5 g / kg) ,银耳提取物中剂量组(1.0 g/kg)，银耳提取物高剂量组(1. 5 g/kg)，取空白未建模大鼠作为空白组，给予等体积的生理盐水，五组大鼠连续灌胃给药28 d，观察大鼠悬尾不动时间和游泳不动时间，并测定大鼠血浆及下丘脑神经递质多巴胺、去甲肾上腺素(NEB含量。结果1.5 g/kg银耳提取物可以显著提高抑郁大鼠体重(P<0.01)，增加大鼠蔗糖偏爱度(P<0.01)，同时1.0一1.5 g/kg银耳提取物剂量依赖性的减少大鼠悬尾不动时间和游泳不动时间(P < 0. 05)，增加大鼠血浆及下丘脑多巴胺(DAB含量(P < 0. 05) 1. 5 g/kg银耳提取物显著提高大鼠血浆及下丘脑去甲肾上腺素(NE)含量(P<0.01)。结论银耳提取物具有显著的抗抑郁活性，其作用可能与其增加大鼠血奖及下丘神经递质含量相关。

关键词:银耳;慢性应激;抗抑郁;去甲肾上腺素;多巴胺

抑郁症是一组高患病、高复发、高自杀、易致残的重性精神障碍资料显示，我国高中生抑郁症状发生率为25 . 8 %，大学生抑郁症状检出率在20 %-60 %，患病率高于国内其他职业人群及国外水平。WHO己将抗抑郁药列为21世纪最需迫切开发的药物之一。

抑郁症的病因目前尚未阐明，普遍接受的是生物胺假说，即抑郁症患者脑内神经递质中的生物胺类等水平下降导致抑郁症发生。临床使用的抗抑郁西药多据此开发，这些药物的疗效肯定，同时也存在巨大的副作用，且价格昂贵，药物依赖性强，巴戟天提取物、姜黄素等中药均被证明具有很好的抗抑郁活性。银耳又称作白木耳、雪耳，研究证明银耳提取物具有保肝抗肿瘤等活性，但是未见关于银耳抗抑郁活性的报道。

本研究建立大鼠漫性应激抑郁症模型，在动物体内中证明银耳提取物的抗抑郁活性，并考察银耳的抗抑郁活性是否同其增强单胺类神经递质分泌相关。

1材料与方法

1.1动物健康成年雄性Wistar大鼠,180 - 220 g购自长春生物制品所，实验动物生产许可证号为:SCXK(辽)2013一0003，实验动物使用许可证号为SYXK(吉)2014 - 0004，饲养期间给予大鼠标准颗粒饲料及纯净饮水，饲养条件:室温23度，湿度52%一58%，保持12 h昼夜节律(白昼时间为7 : 00 -19:00)，自由饮水进食，实验前大鼠适应性喂养7 d。

1.2实验试剂Rat DA Elisa kit ，Rat NE Elisa kit，购买自上海源叶生物试剂有限公司。其他试剂均为分析纯，购买自国药集团化学试剂有限公司。

1.3仪器 多功能酶标仪，购买自美国伯腾;恒温培养箱，购买自黄石市医疗器械厂。恒温水浴，购买自江苏金坛医疗仪器厂;RE - 52E旋转蒸发器，购买自上海雅荣公司。悬尾实验系统，购买自上海欣软信息科技有限公司 强迫游泳实验系统，购买自上海欣软信息科技有限公司。

1.4实验方法

1.4. 1银耳多糖粗提物的制备干燥银耳100 g按液料比10:1 (ml/g)的比例加入去离子水，80℃水浴提取3h，冷却至室温，8 000 r/min离心10 min，收集上清，得银耳水提液，提取重复一次，合并两次提取液，冻干，得银耳提取物，采用苯酚硫酸法测定多糖含量为14. 67 %，备用。

1.4.2大鼠抑郁症模型的建立实验采用改性慢性不可预知应激模型(CUMS)建立抑郁症大鼠模型，空白组大鼠不给予任何刺激;每组16只大鼠，实验组大鼠单笼饲养，并在实验周期(8周)内给予模型大鼠7种不同的慢性应激原刺激，慢性应激原包括:①24 h潮湿垫料;②0℃冰水浴强迫游泳5 min ;③悬挂5 min;④夹尾1  min顺50 0C烘箱烘烤5 min ; )24 h禁食，12

h禁水;⑦昼夜颠倒。上述刺激，每7d为一周期，顺序随机但同一刺激原不得连续使用，方案见表1

1.4.3大鼠分组及给药慢性应激四周后，大鼠随机分为5组，分别为:空白组(Control):空白未建模大鼠，第5 -8周灌胃给予2. 0 ml/kg生理盐水;模型组:8周慢性不可预知应激，第5 -8周灌胃给予2. 0 ml/kg的生理盐水;银耳提取物低剂量组:8周慢性不可预知应激，第5 -8周灌胃给予0. 5 g/kg的生理盐水;银耳提取物中剂量组:8周慢性不可预知应激，第5-8周灌胃给予1.0 g/kg的生理盐水;银耳提取物高剂量组:8周慢性不可预知应激，第5-8周灌胃给予1.5g/kg的生理盐水。大鼠连续灌胃给药28 d，给药期间继续给予刺激。实验期间动物自由取食和饮水。

1.4.4蔗糖水消耗实验给药结束后，大鼠适应性的饮用1%的蔗糖溶液3d后饮用正常饮用水1 d,测试前2h，单笼饲养大鼠，正常摄食，分别为大鼠供应1%蔗糖溶液和自来水，此过程需要保持各试验组蔗糖水的位置均衡。1h后，测定液体饮用量。蔗糖水偏爱度1%蔗糖水的消耗量占总消耗量的百分比。

1.4.5悬尾实验第27 d给药1h后，在大鼠尾部距尾尖端1 cm处用医用胶布粘缚，将其倒吊于距离地面15 cm左右的横杆上，观察6 min，记录大鼠后5 min内的不动时间，大鼠之间采用白板遮挡，避免相互干扰。

1.4.6强迫游泳实验第28 d给药1h后，将大鼠放于直径约20 cm，水深17 cm，水温(2211)0C的塑料桶中，实验观察6 min，记录后5 min内大鼠累积不动时间。

1.4.7组织收集及DA NE含量测定实验结束后，大鼠断头取血，收集血浆。快速摘取大鼠下丘脑组织，采用双蒸水匀浆后，用于含量测定。

1.4.8统计学方法利用SPSS统计软件进行统计分析，数据采用(x1s)表示，采用单因素方差分析(ANO-VA)统计。检验水准。= 0. 05(双侧)。

2结果

2. 1银耳提取物对大鼠体重的影响与空白组相比，模型组大鼠体重显著降低(P<0.01)，与模型组相比，1.5 g/kg银耳提取物可以显著提高慢性应激抑郁大鼠体重(P <0.01)，见图1

2. 2银耳提取物对大鼠蔗糖偏爱的影响见图2。与空白组相比，模型组大鼠蔗糖偏爱度显著下降(p<0.01)。1.5 g/kg银耳提取物显著提高大鼠的糖水偏爱度(P <0.01)。

2. 3银耳提取物降低大鼠不动时间与空白组相比，模型组大鼠5  min内悬尾不动时间均显著上升(P<0.01),1.0,1.5 g/kg的银耳提取物显著降低5 min大鼠悬尾不动时间(P <0.05) o

与大鼠悬尾不动时间相同，与模型组大鼠相比，1.0,1.5 g/kg银耳提取物显著降低5 min内大鼠游泳不动时间(P<0.01)，见图3。

2. 4银耳提取物提高大鼠下丘脑及血浆NE,DA含量与空白大鼠相比，模型组大鼠下丘脑及血浆中DE,NE水平显著下降(P <0.05) ,1.0,1.5 g/kg银耳提取物可以显著提高大鼠下丘脑及血浆DA含量(P<0. 05 )。同时银耳提取物剂量依赖性的增强大鼠下丘脑NE含量(P <0.01)，见图4。

3讨论

   慢性应激抑郁大鼠的一个非常重要的抑郁样的表型就是对蔗糖偏爱度的下降。在本研究中，与空白组相比，模型组大鼠蔗糖偏爱度显著下降，而银耳提取物显著增加抑郁症大鼠蔗糖偏爱度，推断1.5 g/kg银耳提取物具有抗抑郁活性。

    强迫游泳和悬尾实验等是目前常用的抗抑郁药物筛选的行为学检测方法，其原理均为将动物置于不可逃避的环境中，动物会拼命挣扎，企图逃跑，在经过努力不能脱困后，出现间断性不动，表现为“行为绝望”状态，与抑郁症类似，绝多大数抗抑郁药均可缩短动物的不动时间。研究发现，1.0,1.5 g/kg银耳提取物显著提高5 min内抑郁大鼠行为不动时间(P<0. 05 )，因此推断银耳提取物具有一定的抗抑郁活性。

    抑郁症的发病率正在逐步攀升，预计到2020年，可能成为仅次于心脏病的第二大疾病，抑郁症发病机制至今未明，但大量实验研究表明NE,DA等单胺类神经递质含量改变与抑郁症有密切关系。随着对抗抑郁症发病机制的深入了解，天然抗抑郁药物的研究和开发也成了新的热点和发展趋势

    本研究通过慢性应激建立抑郁症大鼠模型，在大鼠体内实验，证明了银耳提取物的抗抑郁症活力，其作用与增加大鼠血浆及下丘脑DA NE含量直接相关。本研究为银耳作为抗抑郁保健食品及药品的广泛应用提供了科学依据。