来宝网 2014/7/30点击726次
ELISA试剂盒质量管理仪器质控
为使ELISA试剂盒仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。
◎移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；
◎水浴箱 经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；
◎洗板机 每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；
◎酶标仪 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
附1：ELISA试剂盒酶标仪校正程序
◎滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-2201型紫外-可见分光光度计（波长精度±0.3nm）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。
◎通噵差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体， 将其（内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右）置于8个通道的相应位置，蒸溜水调零，1于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2板条（8条共96孔）分别加入200ul甲基橙溶液（吸光度调至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水调零,于490nm处检测，其误差大小用±1.96s衡量。
n 零点飘移（稳定性观察）：取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置，均加入200ul蒸溜水并调零，于490nm处每隔30分钟测一次，观察各个通道4小时内吸光度的变化。
ELISA试剂盒◎精密度评价：每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同．浓度的甲基橙溶解，蒸溜水调零，于490nm作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定20天。分别计算其批内精密度，日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV值。
◎线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液，于490nm平行测8次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差s，并用±1.96s表示样品测量的误差范围.双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3种不同浓度的溶血液（测定波长为490nm，校正波长为585nm），先后于8个通道检测，每个通道测3次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。
◎一般酶标仪无585nm滤光片，可选用550nm或630nm滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为630nm）
