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测效靶细胞杀伤,用流式细胞术法
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2012/6/20
点击1428次
本
实验
技
术来
源于SciMall科
学
在
线
做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,国外最常用的是
Cr51
放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而
MTT
这个方法又太老,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。具体参照如下:
1
计数靶细胞,并加入
CFSE
,使
CFSE
终浓度达到
2uM''37
度
30
分钟。
2
拿出后,
1000rpm''5min''
可隐约看到细胞染成黄色,
PBS
洗三次
3
与效应细胞混培,作用
4-6
小时。
4
将细胞混合液消化取出,洗二次,
PI
工作液
5ul
,避光
30
分钟后上流式
5
CFSE
,
PI
双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞,除以靶细胞总数,即为杀伤率。
注意事项:
1
、
CFSE
及
PI
的浓度必须注意,宁低勿高,个人感觉,如果标高的话,在
4
度放一晚好像会好一些
2
、必须设全阴,
CFSE
单标,
PI
单标,
CFSE
+
PI
双标并同步化的靶细胞的参照
.
3
、作用时间不能太长,不要超过
8
个小时。
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