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测效靶细胞杀伤,用流式细胞术法

来宝网 2012/6/20点击1428次

 

实验术来源于SciMall科线

      做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,国外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。具体参照如下:

1
 计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM''3730分钟。
2
 拿出后,1000rpm''5min''可隐约看到细胞染成黄色,PBS洗三次
3
 与效应细胞混培,作用4-6小时。
4
 将细胞混合液消化取出,洗二次,PI工作液5ul,避光30分钟后上流式
5
 CFSEPI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞,除以靶细胞总数,即为杀伤率。

注意事项:
1
CFSEPI的浓度必须注意,宁低勿高,个人感觉,如果标高的话,在4度放一晚好像会好一些
2
、必须设全阴,CFSE单标,PI单标,CFSEPI双标并同步化的靶细胞的参照.
3
、作用时间不能太长,不要超过8个小时。

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