来宝网移动站

膜片钳记录和分析技术

来宝网 2012/2/20点击1711次

 

细胞是动物和人体的基本组成单元,细胞与细胞内的通信,是依靠其膜上的离子通道进行的,离子和离子通道是细胞兴奋的基础,亦即产生生物电信号的基础,生物电信号通常用电学或电子学方法进行测量,形成了一门细胞电生理学(electrophysiology)学科。用电生理方法记录电活动,早期的研究多使用双电极电压钳技术作细胞内电活动的记录。

膜片钳技术是在电压钳技术的基础上发展起来的。

1976年德国马普生物物理化学研究所NeherSakmann首次在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时,记录到乙酰胆碱(Acetylcholine, ACh)激活的单通道离子电流,从而产生了膜片钳技术。1980Sigworth等在记录电极内施加5-50cm H2O的负压吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),大大降低了记录时的噪声水平,实现了单根电极既钳制膜片电位又记录单通道电流的突破。1981HamillNeher等对该技术进行了改进,引进了膜片游离技术和全细胞记录技术,从而使该技术更趋完善,具有1pA的电流灵敏度、1μm的空间分辨率和10μs的时间分辨率。198310月,《Single-Channel Recording》一书的问世,奠定了膜片钳技术的里程碑。为细胞生理的研究带来了一场革命性的变化,膜片钳技术象基因克隆技术一样,给生命科学研究带来了巨大的动力。Sakmann Neher也因其杰出的工作和突出贡献,荣获1991年诺贝尔医学和生理学奖。

膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来,由于电极尖端与细胞膜的高阻封接,在电极尖端笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离,因此,此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管,用一个极为敏感的电流监视器(膜片钳放大器)测量此电流强度,就代表单一离子通道电流。

从所使用的标本来看,已从肌细胞(心肌、平滑肌、骨骼肌)、神经元发展到内分泌细胞、血细胞、肝细胞等其它多种细胞;从急性分散细胞和培养细胞(包括细胞株)发展到脑片乃至整体动物。从蜗牛、青蛙、蝾螈、爪蟾卵母细胞发展到大鼠、人等等。另外也有在植物细胞(如蚕豆保卫细胞)上进行膜片钳研究的报道。

膜片钳技术发展至今,已经成为现代细胞电生理的常规方法,它不仅可以作为基础生物医学研究的工具,而且直接或间接为临床医学研究服务,目前膜片钳技术广泛的应用于 神经科学,脑科学,心肌细胞,心血管,药物学,药理学,生理学,细胞生物学,生殖生理,病理生理,中药学,植物细胞生理学等领域的研究,并可作为细胞生物学与分子生物学研究的桥梁。

推荐仪器
  • *
  • *
  • *
  • *