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我们的优势： ★ 数量多，santacruz提供超过18,920种人和超过18,347种小鼠蛋白的特异性CRISPR/Cas9敲除质粒。 ★ 特异性基因识别 ★ 高效的基因敲除 ★ 低细胞毒性 ★ 设计简单快速，费用低 ★ 每一个CRISPR/Cas9敲除质粒由3条质粒组合确保识别和剪切 特异性基因，获得最大敲除效果。 ★ 每条质粒由来自GeCKO文库特有的20nt序列编码 ★ 每一包装20µg，up to 20 transfections ★ Cas9/gRNA complex binds to proto-spacer adjacent motif(PAM)site and unwinds DNA. ★ gRNA binds to target locus in genomic DNA adjacent to the PAM site. ★ Cas9 cleaves the 5’exons of the gene targeted by the three gRNA plasmids at three specifics sites. ★ Target gene is disrupted.
PARP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid(h):sc-400046.Western blot analysis of human PARP-1 expression in empty vector control(A) and PARP-1 CRISPR/Cas 9 KO Plasmid transfected(B) Hela whole cell lysates. Blot probed with PARP-1(B-10):sc-74470.α-actinin(H-2):sc-17829 used as specificity and loading control.

HDR(Homology Directed Repair) 修复更精准！

HDR质粒提供用于特异DNA的双链断裂(DSB)修复的模板，比non-homologous end -joining(NHEJ)更精确，不用担心非特异性插入或者缺失裂解位点。

★ 该Cre重组载体表达Cre重组酶，噬菌体P1酶催化两个loxP序列之间的位点特异性DNA进行重组。 ★ 当CRISPR/Cas9敲除质粒和HDR质粒共转染后，在HDR修复过程中，含有编码DNA的细胞抗原被选择性插入的标记分离 ★ 选择中，细胞可以被Cre载体转染，在HDR修复中去除插入的基因组DNA，eg:嘌呤毒素抗性基因。
CRISPR/Cas9 铺助试剂:
品名 货号 规格 Control CRISPR/Cas9 Plasmid sc-418922 20µg Plasmid Transfection Reagent sc-108061 0.2ml Plasmid Transfection Medium sc-108062 20ml Puromuycin dihydrochloride sc-108071 25mg

1.CRISPR/Cas9与RNAi技术相比有什么优势？		4.为什么CRISPR/Cas9基因敲除质粒要用三条靶DNA序列组成。
答：CRISPR/Cas9系统是用特异编码的基因组DNA敲除目的蛋白；而RNA干扰是用特异的mRNA降解的技术。一旦基因组DNA被编码，将是永久性的。		答：确保足够的基因被破坏，确保敲除效果。
2.和zinc-finger nucleases (ZFNs) and TALENs相比有什么优势？		5.CRISPR/ Cas9 KO质粒是否可以单独用于敲除基因的功能？
答：CRISPR/Cas9系统具有相同或者更高的基因编辑效率，更便宜。		答：可以，但是会产生非同源末端连接（NHEJ），导致InDels（插入/缺失）。InDels改变了开发阅读框并且能显著改变了下游的DSB的氨基酸序列，引起一个提前终止密码子。InDels可能导致随机突变，这样的基因破坏程度需要通过实验验证。
3.你们是如何设计gRNA序列的？可以提供序列吗?		6.我如何确认我的细胞成功转染了CRISPR/Cas9基因敲除质粒？
答：我们用3条已经在GeCKO v2 library发表的靶序列设计。这种发表的序列具有高修饰效率和低脱靶效应。当然gRNA的序列可以提供给客户，联系优宁维公司。		答：我们可以通过GFP的表达来验证转染效率。进一步的验证来确定基因敲除的程度。

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