来宝网 2014/5/19点击1742次
MSD将Western Blot 从16小时缩短至4.5小时
Percepta在针对550位北美和欧洲的顶级生物医药研究人员的报告中显示，基于电化学发光技术的MSD ( Meso Scale Discovery ) 是最受欢迎的5大免疫分析品牌之一。
改进前：普通WB检测：
WB需要跑胶，转膜，封闭，一抗，二抗，压片等步骤，步骤非常繁琐。流程用最先进的方法也要整整一天，而且还要考虑各个步骤的效率来确认实验成功。
改进后：MSD电化学发光检测：
检测步骤：加样孵育2hr，洗涤；加入检测抗体孵育2hr，洗涤；加入read buffer读数。实验只需4.5小时。
和普通WB相比，MSD电化学发光检测的优势:
1、实验流程更为简便快捷：MSD仅需4.5小时就可以完成整个实验；而传统的WB则需要16小时，在时间上面，MSD更加快捷。
2、结果可定量。
3、灵敏度更高，可发现原来发现不了的差异，见下图（即使0.3ug的上样量仍能检出磷酸化差异，说明极小磷酸化差异就可以被发现，而WB传统总上样量为20ug，极小的磷酸化差异不易被发现。错失重要的数据。
4、线性范围更广：线性范围更广可以避免当高丰度蛋白与低丰度蛋白同时在一张胶上的时候出现不能兼顾压片时间的问题。下图左为MSD结果，可以有效线性涵盖5ng到pg级别，而传统WB技术只能涵盖大约一个数量级的差异。
5、更高通量：MSD可以实现一个孔里10个指标的检测，对于一个信号通路的上下节点同时进行观察，而WB则需要一张一张胶做实验，同样以90个样本，10个磷酸化蛋白检测为例。MSD只需要一块板''4.5小时操作即可，而WB则需要至少80块胶，估计用时1周或者更多。
6、重复性: MSD磷酸化检测可控制CV%在15%以内，而WB一般为30%。
很多在做WB的，已经开始使用“Meso Scale Discovery” 方法，包括Nature作者…
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