对于要进行细胞培养，单细胞测序，细胞分型检测，细胞分选，提蛋白/RNA、抗体批量生产等实验的老师来说，获得高质量的细胞是实验成功的第一步，那细胞从何而来？
一部分老师选择使用细胞系开展实验，比如BHK细胞系（幼地鼠肾细胞），Vero细胞系（非洲绿猴肾细胞）、Hep-2细胞系（人喉表皮样癌细胞）……
也有一部分老师选择获取原代细胞，可以是源于血液中的细胞，比如：人外周血中免疫细胞（T、B、NK、Mo细胞）等；源于组织样本中的细胞，比如：小鼠脾脏中的免疫细胞、肿瘤组织中的TIL细胞等；源于贴壁细胞，比如单核诱导贴壁后形成的巨噬细胞、树突状细胞等；源于悬浮细胞，比如：腹水中的免疫细胞。
针对不同的样本类型，如何制备高质量的单细胞悬液，小编为您一一讲述。
（1）外周血样本
对于病人外周血，我们要先对其进行Ficoll密度梯度离心，根据不同细胞密度不同，进而将其处理成PBMC（单个核细胞），操作流程如下：
•获取抗凝全血，用PBS进行2-4倍稀释； •按照1:1比例，加入
130-096-730
50 T | ||
过滤细胞团块或细胞碎片 | 130-093-237 | 25个 |
带加热模块的全自动组织处理器 | 130-100-008 | 100 mL |
*红细胞裂解液（10×） | <a href="http://www.univ-bio.com/search.php?encode=YTo0width="127"> 130-094-183 | 50 mL |
（3）贴壁细胞
贴壁细胞（adherent cells）:活体体内细胞当离体置于体外培养时大多数以贴壁方式生长，主要包括正常细胞（例如：成纤维细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、心肌细胞以及肝、肺、肾、乳腺、皮肤细胞等）和肿瘤细胞。
•胰蛋白酶消化
胰蛋白酶：最常用，浓度一般0.25%-5%，37℃消化时间一般1-5min，用血清终止；胶原酶：一般用于组织样本消化成单细胞，作用温和，用血清终止。
•离子螯合剂
EDTA：用的比较多，一般浓度在0.02%左右；商品化无酶消化液：分离成单细胞作用强，但是对细胞损伤比较大。
（4）悬浮细胞
悬浮细胞包括临床上常见的胸腹水细胞，尿液，脱落细胞等，这些细胞经过简单处理，就可以应用于下游流式分析，细胞分选，细胞培养等实验，具体操作见：悬浮细胞单细胞悬液制备。
详细信息，请回顾往期流式课堂—第37期 流式分析&分选前样本制备。
