来宝网 2017/10/9点击2137次
HTRF?（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence)）两大技术，开通的一款高通量药物筛选利器。
利用两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。Donor被外来光源激发（例如氙灯或激光），如果它与Acceptor比较接近，可以将能量共振转移到在Acceptor上，使其受到激发，发出特定波长的发射光。 将Donor和Acceptor分别与相互作用 的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将Donor和Acceptor拉到足够近的距离，产生能量转移，由于Acceptor的发射光来自能量转移，所以实验中不需要将未结合与已结合的分子分开，即不需要洗涤步骤。  
TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质，它们与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级。镧系元素的半衰期为毫秒级，有6个数量级的差别。所以，在检测室，TRF有一个时间延迟---50us，经过这个时间延迟，普通荧光的信号几乎为零，所以，TRF的背景非常低，反映样品实际情况。 
HTRF?的能量受体也有二种，XL665和d2.它们的光学性质相同，分子量不同，前者分子量为10KD，实际上就是别藻蓝蛋白（APC）。我们将APC的亚基偶联在一起，使其不能解离，提高了稳定性，后者分子量为1KD，在某些实验中有独特的优势。
HTRF?操作步骤非常简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育，检测即可。 
HTRF?采用了比值法来处理数据，可以去除溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。 
1.操作简单，空板直接加样，加完即可检测，时间短（加样和孵育2h）！ 2.适合珍贵样本：整个实验体系只需20ul 3.均相检测：无需包被，免洗ELISA，省时省力 4.体系稳定：7天内可随时检测，信号基本不变 5.数据客观真实：比值处理可有效去除背景荧光，假阳性率和价阴性率低 6.高端检测，只需简单的酶标仪就可以轻松搞定！
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