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Cisbio-HTRF?技术原理和应用简介

来宝网 2017/10/9点击2137次

HTRF?(均相时间分辨荧光,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence )是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移(FRET,Fluorescence Resonance Energy Transfer)和时间分辨荧光(TRF, Time-Resolved Fluorescence))两大技术,开通的一款高通量药物筛选利器。

荧光共振能量转移(FRET)

利用两种荧光基团的能量转移,这两种荧光基团分别称为能量供体(Donor)和能量受体(Acceptor)。Donor被外来光源激发(例如氙灯或激光),如果它与Acceptor比较接近,可以将能量共振转移到在Acceptor上,使其受到激发,发出特定波长的发射光。

将Donor和Acceptor分别与相互作用 的两个生物分子结合,生物分子的结合可以将Donor和Acceptor拉到足够近的距离,产生能量转移,由于Acceptor的发射光来自能量转移,所以实验中不需要将未结合与已结合的分子分开,即不需要洗涤步骤。

时间分辨荧光(TRF)

 TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质,它们与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级。镧系元素的半衰期为毫秒级,有6个数量级的差别。所以,在检测室,TRF有一个时间延迟---50us,经过这个时间延迟,普通荧光的信号几乎为零,所以,TRF的背景非常低,反映样品实际情况。

HTRF?的能量受体(技术创新点)


HTRF?的能量供体是铕(Eu)和钛(Tb)的穴状化合物。在这个穴状化合物里,Eu和Tb被永久地嵌合在一个笼子里,结构非常稳定,这个结构由J.M.Lehn’s教授发明的,并由此在1987年获得了诺贝尔奖。

HTRF?的能量受体

 HTRF?的能量受体也有二种,XL665和d2.它们的光学性质相同,分子量不同,前者分子量为10KD,实际上就是别藻蓝蛋白(APC)。我们将APC的亚基偶联在一起,使其不能解离,提高了稳定性,后者分子量为1KD,在某些实验中有独特的优势。

HTRF?的操作步骤

HTRF?操作步骤非常简单,只需要将实验所需试剂加进去,然后孵育,检测即可。

HTRF?实验数据分析

HTRF?采用了比值法来处理数据,可以去除溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。

HTRF?应用范围

              

HTRF?技术优势:

 1.操作简单,空板直接加样,加完即可检测,时间短(加样和孵育2h)!
2.适合珍贵样本:整个实验体系只需20ul
3.均相检测:无需包被,免洗ELISA,省时省力
4.体系稳定:7天内可随时检测,信号基本不变
5.数据客观真实:比值处理可有效去除背景荧光,假阳性率和价阴性率低
6.高端检测,只需简单的酶标仪就可以轻松搞定!

HTRF?检测的仪器

 Cisbio与几乎所有的仪器供应商都建立了合作伙伴关系,下面是经过验证的仪器列表:

上海优宁维生物科技股份有限公司

抗体专家 | 流式专家 | 免疫组化专家 | 实验服务专家 | 科学仪器

免费热线:4008-168-068 

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