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RNAi慢病毒载体构建

来宝网 2010/10/14点击3578次

(一.)慢病毒载体构建
慢病毒(Lent virus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达的效果。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。
(二)病毒包装、扩增:
将鉴定正确的基因克隆到慢病毒载体,与辅助载体一起转染293T细胞进行包装;
将包装好的病毒超速离心收集;
将浓缩病毒进行滴定,滴定结果单位为PFU/ml(一般为5×108 PFU/ml以上,体积为500μl以上,根据客户需要,不同量有价格差异)
二、质量控制与鉴定:
测序鉴定
根据特定引物作RT-PCR鉴定
蛋白表达鉴定(根据客户要求并由客户提供高特异性抗体)
三、客户须知:
对于客户所要构建腺病毒的目的基因,客户须提供详细的基因相关信息,包括基因序列,载体序列,载体图谱。载体构建步骤所需时间,根据不同构建方案,需15到25个工作日。从合同签订之日起,客户需交纳首期技术服务费(50%服务费),方可进行实验。服务结束时一次结清余款。
客户需提供的信息及材料
插入目的片段序列信息,原始载体序列信息,载体图谱,酶切分析图等。
鉴定正确的原始质粒,PCR引物及PCR鉴定方法说明(包括PCR体系及PCR条件)(非必需,或需协商),测序引物(非必需,或需协商)。
原始质粒的酶切鉴定报告、测序报告,如果客户确定基因的信息无误,这条非必需。
实验目的、要求,目的基因有无细胞毒性,是否需要构建对照病毒?
实验要求包括:
是否自行构建腺病毒载体?是否要求更换启动子、polyA等基因元件?
实验目的包括:
用于细胞实验还是动物实验,需要感染的细胞类型或动物模型类型。
四、我们的承诺:
构建腺病毒/慢病毒载体的时间约15到25个工作日。病毒的包装,扩增的时间约20到30个工作日。总计需要45-55个工作日。
提供重组穿梭载体或者siRNA载体,重组腺病毒载体的酶切及测序报告。
免费提供一管阴性对照(仅限通用型的,如果客户指定的序列,需要另外计费)。
最大插入片段5kb-8Kb。
补充说明:
如果客户需更换启动子,需保证所插入的基因的表达产物对细胞无毒害作用,
如果插入的目的片段太长,客户要求测序验证全长,需要提供基因的特异引物,以测得全长,加收一定的费用。

www.abigen.com        info@abigen.com  

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