来宝网 2011/10/10点击1891次
低丰度蛋白,尽管稀少,却常常带有重要信息。在疾病治疗方面,它们往往充当了诊断、预后和治疗效果的标记物,也可能是治疗的靶点。在蛋白质组学分析方面,研究者也希望能获得复杂样品中低丰度蛋白,从中找到具有特殊作用的成员。然而,犹如大海捞针一般,它们却并不好找。近年来,研究人员正不断提出新的方法和技术,从生物样品中挑出低丰度蛋白,以便确切地了解它们是什么,以及它们意味着什么。 MF-10 Gradiflow系统可以通过不同的蛋白分子量和PI值将样品中的区别,方便快捷的分离复杂样品的蛋白。由于样品在分离时,不需要变性处理,因此MF-10分离的样品保存着原本的活性。
血浆的低丰度蛋白越来越成为科学研究的热点,越来越多的证据也表明,血浆的很多低丰度蛋白是十分重要的疾病标记物,其表达的异常,与疾病的发展密切。2-DE(双向电泳)是分离不同分子量和PI值蛋白的有效方法,但由于大量的低丰度蛋白往往与高丰度的蛋白结合在一起,大体积复杂样品的双向电泳的效果并不理想。
许多研究人在竭尽全力的在寻找更多的办法得到这些低丰度的蛋白。但试想一下,这些低丰度的蛋白被高丰度蛋白结合或是掩盖,工作的难度可想而知。澳大利亚MinomicAnna Fitzgerald决定利用MF-10 Gradiflow系统 (现称 ProteomeSep'' 由澳大利亚NuSep公司所生产),来分离血浆中的蛋白,通过一步初步的分离,然后将样品再通过2-DE分离,希望获得较理想的分离结果。
通过分子量分离。分离柱的两侧是两个5kDa的NMWCO膜,中间放置了1000'' 500'' 150'' 65 and 45 kDa 的NMWCO膜,从而将柱分为6个槽室。在阴极点样品,加一定电压,不同大小范围的蛋白将被分离在不同的槽室。
通过蛋白PI值分离。将5个1000kDa的NMWCO膜放置在柱中间,将柱分为6个槽室。每个槽室点样品,加电压,样品将按照PI值分开。
Anna Fitzgerald利用MF-10分离血浆样品,获得比较理想的结果。而研究者所做的就是简单的两步电泳。但大大降低了高丰度蛋白在样品中的比重,使得分离难度大大降低。
MF-10 Gradiflow系统很好的解决了复杂样品中低丰度蛋白难以分离的问题,方便快捷的操作,不仅可以用于血浆中蛋白质组学的研究,脑脊液、尿液等的分析中也有着广泛的应用。
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