来宝网 2011/6/23点击1393次
样品制备：取1 g样品，至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静置30 min沉淀蛋白，上清液作为待净化液。
层析柱填装：分别称取0.5 g SCX (P/N 04G-4413)和SAX (04G-4414) 填料,依次加入内径1CM的玻璃层析管中，加甲醇5 mL活化，待用。
净化：向活化好的层析管中精密加入待净化液5 mL，收集所有滤出液，用甲醇1 mL清洗滤出液，清洗3次；合并所有的滤出液，蒸干（或氮气吹干），用甲醇溶解并定容至
5 mL，摇匀，移至玻璃离心管中，10000转/min离心5 min,上清液作为样品溶液。
色谱条件：
色谱柱：Kinetex PFP 2.6 μ 100×4.6 mm(00D-4477-E0)
流动相：
图一
检测波长：230 nm
柱温：室温
进样量：10 μl
图二
色谱图：阴性乳酸菌饮料加标图谱（加标后浓度：1 μg/mL）
图三
讨论：
1、由于邻苯二甲酸酯类物质存在于很多塑料制品中，因此，实验全过程应该避免使用塑料材质的实验器材。
2、各类饮料中成分非常复杂，包括各种色素、维生素、蛋白质、和各种食品添加剂。自制层析柱包含强阳离子交换和强阴离子交换，可以除去大多数酸性物质和碱性物质，尽可能多地除去干扰，且不会吸附中性的邻苯二甲酸酯类的目标物。
3、和经典的C18反相柱比较，PFP色谱柱（五氟苯基柱）对结构类似的化合物有更好的选择性，同时芳香选择性使部分极性较大的目标物有更好的保留，减小干扰。
4、17 min处峰为样品杂质。
5、本方法可直接转移至LC/MS/MS中，但建议色谱柱规格更换为：
Kinetex 2.6μ PFP 100×2.1 mm色谱柱，流速可设置为200-500 μl/min。
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