来宝网 2011/4/1点击3346次
<p>【摘要】高效液相色谱法在分析方面和食品安全性检测的应用范围很广,具有高效、高速、高灵敏度【1】、流动相可选择范围宽、流出组分容易收集的优点,既可用于分离也可用于定量,更适用于各种各样的化合物。而且随着一些样品前处理新技术,如固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、基质固相分散萃取(MSPDE)、超临界流体萃取(SFE)、凝胶渗析萃取(GPC)技术相继出现并很快推广,以及计算机软件开发、专家系统应用、检测手段的进步及与质谱等仪器的联用等相关问题的解决,高效液相色谱法的应用也会越来越多。</p> <p>【关键词】 高效液相色谱法 食品分析 食品安全检测</p> <p>一、高效液相色谱法</p> <p>高效液相色谱法(HPLC)是上世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分析分离技术。【2】它是由现代高压技术与传统的液相色谱方法相结合,加上高效柱填充物和高灵敏检测器所发展起来的新型分离分析技术,是以经典液相色谱法为基础,引入了气相色谱的理论与实践方法，流动相改为高压输送,采用高效固定相在线检测手段发展而成的分离分析方法，分离机制是靠被分离组分的分子与流动相分子争夺吸附表面活性中心的吸附能力差别而分离(可用吸附系数Ka衡量吸附能力的差异)，是现代分离分析的重要手段，随其分离检测技术的日益完善,已被广泛应用于各个学科中。由于它只要求样品能制成溶液,而不需要气化,因此不受样品挥发性的约束。对于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物尤为有利,如氨基酸、蛋白质、生物碱、核酸、脂类、维生素、抗生素等分子量较大,沸点较高的合成药物以及无机盐类。所以说HPLC具有适用范围广、分离效率高、速度快、流动相可选择范围宽、灵敏度高、色谱柱可反复使用、流出组分容易收集、安全等优点。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。</p> <p>高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。所用的固定相为大于100ｕm 的吸附剂（ 硅胶、氧化铝等）。这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大，传质扩散慢，因而柱效低，分离能力差，只能进行简单混合物的分离。而高效液相所用的固定相粒度小（5ｕｍ-10ｕｍ）、传质快、柱效高。【3】</p> <p>二、高效液相色谱法在食品分析中的应用</p> <p>高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80％的有机化合物可以用HPLC来分析测定。其主要分析方面：</p> <p>1、食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；</p> <p>2、食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；</p> <p>3、食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。 </p> <p>三、高效液相色谱法在食品安全检测中的应用</p> <p>食品贸易的全球化使广大消费者受益,大量高品质、价格合理、安全的食品应运而生,满足着广大消费者的需要。日趋加速的城市化状况使食品的制作、运输、贮存、销售需求不断增加，与此同时又有一些不法制假商贩制造或贩卖伪劣食品,甚至在食品中掺入有毒化学品,给消费者造成极大伤害。这就需要有一套完整的监测监督机制作为降低食源性危害的有效手段,许多食品安全项目正越来越侧重于从农田到餐桌的整个过程,虽然国家在保证食品安全方面作大量的工作,每年仍有相当数量的消费者因进食受污染的食品而中毒、发病、乃至死亡。食品安全已成为世人十分关注的热门话题,食品安全监测面临着严峻挑战。因此,急需建立快速调查食源性疾病和监测食品污染的措施和方法。在此浅析高效液相色谱(HPLC)技术在食品安全检测方法中的应用。</p> <p>1、HPLC对食品添加剂及农药的测定</p> <p>苏丹(Sudan)色素是一种人工合成染料,在化工生产中主要用于对油类、蜡和肥皂的染色。有关研究表明,苏丹会导致鼠类患癌,它对人类肝细胞也显现出可能致癌的特性。李军等建立了食品中4种苏丹色素的高效液相色谱同时测定方法。采用乙腈提取后经凝胶渗透色谱法对样品进行净化,利用反相高效液相色谱法,以乙腈-酸性水溶液为流动相,采用梯度洗脱,以二极管阵列检测器定性定量测定食品中的4种苏丹色素,结果最低检出限分别为0.102、0.097、0.074、0.099mg/kg。【2】</p> <p>目前蔬菜水果中不同种类农药的残留测定方法主要是气相色谱法(GC)或气相色谱-质谱法(GC2MS),但GC对沸点高或热稳定性差的农药需进行衍生化处理,这样就不可避免地增加了样品前处理的难度,也使它的应用受到一定程度的限制。李永新等建立了同时测定蔬菜水果12种农药残留的反相高效液相色谱分析方法。将样品捣碎,用乙酸乙酯超声提取,经Florisil固相萃取柱净化、正己烷2二氯甲烷(1B1)洗脱、氮气吹干、甲醇溶解并定容后,采用高效液相色谱柱分离、紫外检测,以外标法定量。结果表明:5种有机磷农药、6种拟除虫菊酯类农药和除草剂二甲戊乐灵的检测限为0.114-2.65ng。【2】</p> <p>2、HPLC对食品中兽药残留物的测定</p> <p>盐酸克仑特罗(俗称瘦肉精)系B2受体兴奋剂，禁止作为畜禽类生长促进剂使用。近年来,我国曾多次报道了因食用含有盐酸克仑特罗残留的猪肉及内脏等造成的中毒事件。陈金枝等建立HPLC法测定猪眼、猪肝、猪肺中微量盐酸克仑特罗，样品经乙醚2丁醇提取,用HypersilC18色谱柱,甲醇-0.01moL/L磷酸二氢钾溶液为流动相。结果样品中盐酸克仑特罗最小检测量为0.20ng。【2】</p> <p>3、HPLC测三聚氰胺的含量</p> <p>三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺一甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业，目前是重要的尿素后加工产品。此外三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。这种化学品含有氮元素，蛋白含量的传统测定方法是通过测定产品中总氮的含量，因此一些饲料厂通过在饲料中添加三聚氰胺提高产品中总氮的含量从而导致蛋白含量测定值偏高。2007年3月中旬以来，美国发生多起猫、狗宠物中毒死亡事件。美国食品药品管理局调查发现从江苏徐州某公司和山东滨州某公司进口的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中含有三聚氰胺，初步认为宠物食品中含有的三聚氰胺是导致猫、狗中毒死亡的原因。因此对我国三聚氰胺含量的监测是十分必要的。三聚氰胺(含量：>98％)的传统测量方法是间接测定，往往是在测定其它杂质如水分、灰分、碱溶物后以差减方法求得其含量。近年来开始采用直接的测试方法：如升华法、重量法等。GB 9567—1988中采用重量法测定三聚氰胺的含量。该方法的缺点是操作繁琐，分析时间长(约为8h)，测定低含量三聚氰胺时误差大。采用HPLC法测定饲料中三聚氰胺的含量，利用了HPLC中紫外一可见检测器的高灵敏度的特点测定低含量成份，测定时间约为1O分钟，操作简便、灵敏、结果准确。【4】 </p> <p>参考文献</p> <p>【1】《分析化学》 武汉大学主编 第五版下册</p> <p>【2】《高效液相色谱法在食品安全检测中的应用概况》</p> <p>【3】《高效液相色谱分析法》</p> <p>【4】《高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量》倪沁颜 福建省测试技术研究所</p>
