兔组织因子途径抑制因子(TFPI) ELISA 试剂盒 96T/48T

操作步骤：
1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

使用范围：此产品供科研实验使用，不得用于临床。


[说明]
1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

2.终的实验结果与试剂实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到佳的检测结果。

5.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

7.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

8.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。

兔组织因子途径抑制因子(TFPI) ELISA 试剂盒 96T/48T

*特别提醒*
1.取样和存样所用的冻存管、离心管、吸头等需高温灭菌处理；
2.所有存样管口需以封口膜封好；
3.所有样品管壁需要用防水记号笔清晰标明编号（便于区分即可）；
4.所有样品避免反复冻融5.如有特别要求，请与服务该区域的销售经理讲明。



注：
1.以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月。

2.如果样本种类在实验手册中没有提到，一般需要做预实验以确定试剂盒能被用来检测您的样品。

3.用于组织或细胞裂解的化学裂解液中的某些化学物质可能会影响ELISA实验结果。

4.由于其他来源的抗原可能和本公司试剂盒中使用的抗体不匹配（例如，抗体的目标，是构象表位而不是线性表位），其他一些制造商的非重组或重组蛋白可能无法被本公司试剂盒所识别。

5.由于包括细胞活力，细胞数量，以及采样时间等因素，从细胞培养上清液提取的样品，可能无法被检测。

6.建议采用新鲜样品来检测，不要存放时间过长。否则，蛋白质降解和变性可能发生，*终导致错误的结果。

7.标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。



特别说明:
#.一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.

化学发光免疫分析试剂盒
1.在各孔中加入标准品或样品各100μL，37°C孵育90分钟
2.倒去孔内液体，拍干，加入100μL生物素化抗体工作液，37°C孵育 60分钟
3.洗涤3次
4.加入 100μL酶结合物工作液，37°C孵育 30分钟
5.洗涤5次
6.加入100μL 发光底物混合液，37°C孵育5分钟左右
7.立即测定各孔的化学发光值
8.结果计算

实验注意事项

1. 抗原和抗体的储存：应严格按照说明书要求存放抗原和抗体，避免反复冻融和长时间暴露在高温环境中。同时要试剂盒未过期，以获得可靠的实验结果。

2. 加样技术：加样时应加入的体积准确且不产生气泡，避免加在孔壁的边缘，以免影响与固相表面的接触。加样时应在每孔的旁边放置一个加样对照孔，以监测加样的准确性和重复性。

3. 温育：温育是ELISA实验中的重要步骤，温育时间和温度的控制对于抗原抗体反应的进行和结果的影响至关重要。必须严格按照说明书要求进行温育，并注意保持恒温状态。

4. 洗涤：洗涤是ELISA实验中不可缺少的一步，它可以去除未结合的物质，提高检测的特异性和灵敏度。洗涤时应每次洗涤时间充足，并更换洗涤液以洗涤效果。同时要避免在洗涤过程中产生气泡，以免影响洗涤效果。

    上海笃玛生物科技有限公司专业研发 ELISA试剂盒长期为科研机构、高校和科研人员提供优质产品，在产品质量的同时，我们还配有扎实的售后技术咨询和服务

服务承诺：
一、产品品质保障（打造高品质产品，若产品质量存在任何问题，公司一律包退包换，质量有保障，解除了客户的后顾之忧）
二、提供免费代测服务（我司拥有专业酶免技术的工作人员为客户提供来样检测服务,限度实验结果）
三、提供全程技术指导（专业的科顺技术人员进行指导）
四、全天在线服务（如果您在使用ELISA试剂盒产品时有任何的疑问，或者对我们有任何意见建议，您都可以通过来电或咨询。）


免费代测 售后无忧 可按照要求定制
方便快捷 用途广
特异性强 重复性好 灵敏度高

兔组织因子途径抑制因子(TFPI) ELISA 试剂盒 96T/48T

试验原理：
本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。


ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法
1、拟和曲线：
输入： 浓度值， 如0 10 50 100 400
输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”;选择“系列产生在行”，按“下一步”;数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。
单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。

2、计算浓度：：
标准曲线为：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
为例，已知OD值，计算浓度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0

化学发光免疫分析试剂盒
规格：96T/48T
检测方法：双抗体夹心法
检测范围:31.25~2000pg/mL

性能:
1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2．灵敏度：检测浓度小于10 pg/ml。
3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

ELISA试剂盒优点：
1、灵敏、特异的抗体；
2、重复性和可靠性高；
3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；
4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；
5、可检测指标齐全：细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等；
6、价格优惠，限度的节省实验经费。

影响试剂盒质量的因素
     ELISA试剂盒变质是ELISA实验中比较常见的问题，下面小结影响ELISA试剂盒质量事项。

1、试剂因素
不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难质量一致，即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保存条件。 严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控及重新评估试剂的复杂过程，并且能够结果的稳定性；对于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，避免反复冻融造成试剂的失效。

2、样本因素
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素，前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体等，后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。

3、操作因素
ELISA操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。加样、温育、洗涤、显色、比色。

4、方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的bu公平竞争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。

5、灰区的设置
通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。

6、标本复查
ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

7、常表示结果的常用方法
1).定性测定。
2).半定量测定 结果一般以滴度表示。
3).定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。


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