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大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒 96T/48T
产品报价:询价
更新时间:2024/2/3 10:34:24
产地:上海
品牌:DUMABIO
型号:96T/48T
厂商性质: 生产型,
公司名称: 上海笃玛生物科技有限公司
孙涵 : (15214367449) (4009681786)
(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)产品报价:询价
更新时间:2024/2/3 10:34:24
产地:上海
品牌:DUMABIO
型号:96T/48T
厂商性质: 生产型,
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孙涵 : (15214367449) (4009681786)
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大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒 96T/48T
产品规格:96T/48T(可拆)
产品数量:咨询
产品应用:ELISA实验
产品货期:现货
保质期:6个月
保存条件:2-8℃
大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒 96T/48T
实验原理
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用的免疫学检测技术,其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应,通过酶促反应放大信号,检测微量的蛋白质、细胞因子等生物活性物质。ELISA实验中所需的试剂和耗材需满足一定的质量要求,以确保实验结果的准确性和可靠性。
准备工作
1.孔板室温平衡1小时
2.做好布板图谱
3.样本解冻
4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒
5.准备双蒸水
6.根据样本量配好样本希释液
7.根据样本量及洗板次数配好洗液
8.若需要提前设置好振板器、洗板器
9.准备足够量的擦手纸
10.根据说明书提示,溶解标准品
11.配制不同浓度的标准品
12.配制质控品
13.根据预实验结果稀释样本
14.准备好封板膜
实验步骤
1. 抗原包被:将抗原溶液加入到酶标板孔中,包被抗原,使其在孔底形成一层薄膜。
2. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的抗原和其他杂质。
3. 阻断:加入阻断液,封闭酶标板孔中的非特异性结合位点,以减少非特异性结合。
4. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的阻断液和其他杂质。
5. 加样:加入待测样本,使其与抗原发生特异性结合。
6. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的样本和其他杂质。
7. 加酶标抗体:加入酶标记的抗体,使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。
8. 清洗:清洗酶标板,去除未结合的酶标抗体和其他杂质。
9. 显色反应:加入底物溶液,发生酶催化反应,产生有色产物。
10. 终止反应:加入终止液,停止酶催化反应。
11. 检测:用酶标仪测定各孔的光密度值,记录数据。
样本处理
1.组织取出前尽量进行心脏灌流
2.组织表面不能有毛发等不相关组分
3.组织称重(mg)后立即放入EP管中
4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)
5.用匀浆机进行组织匀浆
6.离心
7.小心吸取上清
注意事项
在进行ELISA检测时,需要注意以下几点:
1. 试剂盒的质量:选择质量可靠、经过检测的试剂盒,避免使用过期或质量不稳定的试剂。
2. 标准化操作:按照试剂盒说明书进行标准化操作,避免操作过程中的人为误差。
3. 避免交叉污染:在实验过程中,要特别注意防止样品和试剂之间的交叉污染,以免影响检测结果的准确性。
4. 温度控制:ELISA检测需要在恒温条件下进行,因此要确保实验过程中温度的稳定和准确性。
5. 空白吸光度值:在实验过程中,要特别注意空白吸光度值的稳定性,避免其对检测结果的影响。
6. 实验数据的处理:对实验数据进行正确的处理和分析,包括对异常值的处理、数据转换等,以确保结果的准确性和可靠性。
7. 质量控制:在实验过程中,应进行必要的质量控制,如定期进行室内质控和室间质评等,以确保实验室检测结果的准确性。
结果分析
根据试剂盒提供的标准品浓度及对应的OD值,利用标准品绘制的标准曲线,计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理,通过计算得到待测样品的浓度。
试剂盒会出现的问题及解决办法:
1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶标记物。
解决办法:请按照操作步骤进行。
b.原因:试剂盒内容物未能充分回。
解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因:室温太低。
解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。
d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因:试剂盒已过保质期限。
解决办法:请更换成仍在保质期限内的试剂盒。
2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。
a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。
解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。
b.原因:操作时间拖太久。
解决办法:请在方法熟练后再进行操作。
c.原因:微孔间相互污染。
解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。
解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。
e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。
解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。
f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。
3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因:室温太高(>25℃)。
解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因:底物溶液受到污染。
解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。
c.原因:反应时间超过太久。
解决办法:请控制反应时间。
d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)
4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。
解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。
解决办法:请参考2-f.
c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法: 请参考2-d.
大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒 96T/48T
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