牛细胞周期素A1(CCNA1) ELISA 试剂盒 96T/48T 实验原理

                       供体外研究使用，不用于临床诊断!

牛细胞周期素A1(CCNA1)  ELISA 试剂盒 96T/48T 实验原理  

产品规格：96T/48T（可拆）

产品数量：咨询

产品应用：ELISA实验

产品货期：现货

保质期：6个月

保存条件：2-8℃

准备工作

1.孔板室温平衡1小时

2.做好布板图谱

3.样本解冻

4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒

5.准备双蒸水

6.根据样本量配好样本希释液

7.根据样本量及洗板次数配好洗液

8.若需要提前设置好振板器、洗板器

9.准备足够量的擦手纸

10.根据说明书提示，溶解标准品

11.配制不同浓度的标准品

12.配制质控品

13.根据预实验结果稀释样本

14.准备好封板膜

牛细胞周期素A1(CCNA1)  ELISA 试剂盒 96T/48T 实验原理

样本处理

在处理样本时，需要无菌操作，避免污染。同时，需要按照试剂盒说明书的要求，将样本进行适当的稀释和处理。如果样本中存在杂质或颗粒物，需要先离心或过滤处理。

注意事项

在进行ELISA检测时，需要注意以下几点：

1. 试剂盒的质量：选择质量可靠、经过检测的试剂盒，避免使用过期或质量不稳定的试剂。

2. 标准化操作：按照试剂盒说明书进行标准化操作，避免操作过程中的人为误差。

3. 避免交叉污染：在实验过程中，要特别注意防止样品和试剂之间的交叉污染，以免影响检测结果的准确性。

4. 温度控制：ELISA检测需要在恒温条件下进行，因此要确保实验过程中温度的稳定和准确性。

5. 空白吸光度值：在实验过程中，要特别注意空白吸光度值的稳定性，避免其对检测结果的影响。

6. 实验数据的处理：对实验数据进行正确的处理和分析，包括对异常值的处理、数据转换等，以确保结果的准确性和可靠性。

7. 质量控制：在实验过程中，应进行必要的质量控制，如定期进行室内质控和室间质评等，以确保实验室检测结果的准确性。

操作步骤：

1. 加样：设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高，可以用样品稀释液进行稀释，使样品符合试剂盒的检测范围。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物s标记抗体工作液 100μl（取1μl生物su标记抗体加99μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物su标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

牛细胞周期素A1(CCNA1)  ELISA 试剂盒 96T/48T 实验原理

试剂盒会出现的问题及解决办法：

1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶标记物。

解决办法：请按照操作步骤进行。

b.原因：试剂盒内容物未能充分回。

解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作。

c.原因：室温太低。

解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。

d.原因：未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法： 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因：试剂盒已过保质期限。

解决办法：请更换成仍在保质期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。

a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因：操作时间拖太久。

解决办法：请在方法熟练后再进行操作。

c.原因：微孔间相互污染。

解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。

解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因：添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法：加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔。

f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法：请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因：室温太高(>25℃)。

解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因：底物溶液受到污染。

解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。

c.原因：反应时间超过太久。

解决办法：请控制反应时间。

d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因：微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法： 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因：洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办法：请参考2-f.

c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法： 请参考2-d.

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可确保结果的准确性。

4. 混合后的显色底物在上板前应为无色，请避光保存；加入微孔板后，将由无色变成不同深度的蓝色。

5. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。

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