牛转运蛋白1(TNPO1) ELISA 试剂盒 说明书 96T/48T

实验原理

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学检测技术，其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过酶促反应放大信号，检测微量的蛋白质、细胞因子等生物活性物质。ELISA实验中所需的试剂和耗材需满足一定的质量要求，以确保实验结果的准确性和可靠性。

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标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 

生物su标记抗体的稀释原则：临用前以生物su标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su标记抗体加990μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 

操作步骤

1. 包被：将抗原溶液加入聚苯乙烯酶标板孔中，包被抗原，37℃孵育1小时。

2. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的抗原和其他杂质。

3. 阻断：加入阻断液，37℃孵育30分钟，以封闭酶标板上的非特异性结合位点。

4. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的阻断液和其他杂质。

5. 加样：加入标准品和待测样本，37℃孵育1小时。

6. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的蛋白质。

7. 加酶标抗体：加入酶标记的抗体，37℃孵育1小时。

8. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的酶标抗体。

9. 显色：加入TMB底物溶液，37℃孵育15-30分钟。

10. 终止反应：加入终止液，停止显色反应。

11. 检测：在450nm波长下读取吸光度值（OD值）。

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注意事项

1. 试剂盒保存于2-8℃，切勿反复冻融或长时间保存于室温。

2. 实验前确保所有试剂均已恢复至室温。

3. 加样时注意避免产生气泡。

4. 洗涤时要确保充分洗涤，避免残留物影响实验结果。

5. 底物溶液应避光保存，避免长时间暴露于空气中。

6. 酶标仪应使用450nm波长进行读数，其他波长可能导致误差。

7. 本试剂盒只用于科研实验和诊断参考，不适用于临床诊断和治疗。

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样本处理

在处理样本时，需要确保无菌操作，避免污染。同时，需要按照试剂盒说明书的要求，将样本进行适当的稀释和处理。如果样本中存在杂质或颗粒物，需要先进行离心或过滤处理。

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

ELISA试剂盒适用行业

ELISA试剂盒应用于生命科学研究、临床医学和工业等领域。

1.在生命科学研究领域，ELISA试剂盒可以用于检测细胞因子、激素、酶、抗体等分子的含量和活性，用于生理学、免疫学、分子生物学等研究领域。

2.在临床医学诊断中，ELISA试剂盒可以用于检测血清中的肿瘤标志物、病毒抗体、心肌酶等指标，用于临床诊断及疾病监测。

3.在食品安全检测中，ELISA试剂盒可以用于检测食品中的抗生素残留、农药残留等有害物质，用于食品质量检测和安全评估。

4.在环境监测中，ELISA试剂盒可以用于检测环境中的化学物质、微生物等污染物，用于环境监测和污染治理。

5.在动物疾病防控中，ELISA试剂盒可以用于检测动物血清中的病毒抗体、细菌抗原等指标，用于动物疫病防控和兽药残留检测。

总之，ELISA试剂盒在许多行业中都有应用。

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