牛白介素33(IL-33) ELISA 试剂盒 说明书 96T/48T

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ELISA试剂盒的实验原理

ELISA试剂盒的实验原理是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上的，同时结合了酶的催化作用。其基本原理包括三个方面：

1.抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性。

2.抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性。

3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。

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ELISA试剂盒的操作步骤如下

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。

2.洗涤：弃包被液（用力拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。

3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。

4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。

5.结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检血清，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。

6.洗涤：同上。

7.结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h。

8.洗涤：同上。

9.显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。

10.待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定血清抗体水平。

以上步骤供参考，具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。

注意事项

1. 试剂盒的质量：选择质量可靠、经过检测的试剂盒，避免使用过期或质量不稳定的试剂。

2. 标准化操作：按照试剂盒说明书进行标准化操作，避免操作过程中的人为误差。

3. 避免交叉污染：在实验过程中，要特别注意防止样品和试剂之间的交叉污染，以免影响检测结果的准确性。

4. 温度控制：ELISA检测需要在恒温条件下进行，因此要确保实验过程中温度的稳定和准确性。

5. 空白吸光度值：在实验过程中，要特别注意空白吸光度值的稳定性，避免其对检测结果的影响。

6. 实验数据的处理：对实验数据进行正确的处理和分析，包括对异常值的处理、数据转换等，以确保结果的准确性和可靠性。

7. 质量控制：在实验过程中，应进行必要的质量控制，如定期进行室内质控和室间质评等，以确保实验室检测结果的准确性。

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ELISA试剂盒组成

ELISA测定结果计算方法

1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。

2.两个平均数的差(P-N)必须大于一个特定的数值，例如0.400，试验才有校。

3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。

4.阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05。

5.标本A值>阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。

需要注意的是，试剂盒的常数只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。

产品包装：盒装

性状：瓶装液体

规格：96T/48T

保存条件：2-8℃

保存期限：6个月

运输条件：2-8℃低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。

ELISA的发展史

1、 分子生物学正在并肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而*的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有校的。

2、ELISA测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。

3、ELISA试剂盒它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。

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