牛淀粉样前体蛋白(APP) ELISA 试剂盒 说明书 96T/48T

牛淀粉样前体蛋白(APP) ELISA 试剂盒  说明书  96T/48T

实验原理

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学检测技术，其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过酶促反应放大信号，检测微量的蛋白质、细胞因子等生物活性物质。ELISA实验中所需的试剂和耗材需满足一定的质量要求，以确保实验结果的准确性和可靠性。

操作步骤：

1. 加样：设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高，可以用样品稀释液进行稀释，使样品符合试剂盒的检测范围。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

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试剂盒组成

准备工作

1.孔板室温平衡1小时

2.做好布板图谱

3.样本解冻

4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒

5.准备双蒸水

6.根据样本量配好样本稀释液

7.根据样本量及洗板次数配好洗液

8.若需要提前设置好振板器、洗板器

9.准备足够量的擦手纸

10.根据说明书提示，溶解标准品

11.配制不同浓度的标准品

12.配制质控品

13.根据预实验结果稀释样本

14.准备好封板膜

保存条件及保质期

1.试剂盒保存：2-8℃。

2．保质期：6个月

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

注意事项

在进行ELISA检测时，需要注意以下几点：

1. 试剂盒的质量：选择质量可靠、经过检测的试剂盒，避免使用过期或质量不稳定的试剂。

2. 标准化操作：按照试剂盒说明书进行标准化操作，避免操作过程中的人为误差。

3. 避免交叉污染：在实验过程中，要特别注意防止样品和试剂之间的交叉污染，以免影响检测结果的准确性。

4. 温度控制：ELISA检测需要在恒温条件下进行，因此要确保实验过程中温度的稳定和准确性。

5. 空白吸光度值：在实验过程中，要特别注意空白吸光度值的稳定性，避免其对检测结果的影响。

6. 实验数据的处理：对实验数据进行正确的处理和分析，包括对异常值的处理、数据转换等，以确保结果的准确性和可靠性。

7. 质量控制：在实验过程中，应进行必要的质量控制，如定期进行室内质控和室间质评等，以确保实验室检测结果的准确性。

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结果分析

根据试剂盒提供的标准品浓度及对应的OD值，利用标准品绘制的标准曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算得到待测样品的浓度。

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