泰克生物着力于为客户提供高质量，且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得，积累了充足的抗体定制和重组蛋白生产经验。基于酵母体展示技术（Yeast Display Technology）平台的服务，泰克生物能够为客户提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、驼源等不同物种的单克隆抗体制备服务，及其配套的完整可追溯性文件。
酵母抗体展示技术（Yeast Display Technology）是指用抗体序列可变区与凝集素Aga2p融合表达，Aga2p蛋白亚基通过两个二硫键与固定在酵母细胞壁上的Aga1p 蛋白亚基结合，结合流式分选技术，将靶向抗原的特异性抗体给筛选出来。
█ 酵母展示抗体文库构建服务
泰克生物可为客户提供来自驼源VHH纳米抗体库，以及其他物种scFv形式抗体的酵母展示文库构建及筛选服务。VHH纳米抗体库，又称为驼源重链抗体文库，抗体分子量大小为15kDa，是驼源动物产生的特有的一种抗体。酵母抗体文库展示受限于自身物理特性限制，物理库容滴度一般<107，因此主要应用于客户对项目库容要求不高，动物免疫后PBMC细胞经过二次分选以及避免漏掉二硫键形成的抗体发现项目。同时酵母展示文库相对噬菌体展示文库技术而言，前者在微量抗体表达后抗体活性层面相较于后者要高，得益此基础，在流式筛选时就能区分抗体的亲和力高低。
应用于CAR-T/CAR-NK治疗性抗体，主要以驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）发现为主，VHH/scFv抗体酵母展示发现路径如图1所示：
图1基于酵母技术平台的VHH/scFv抗体发现服务
█ 服务内容和周期
步骤 | 服务内容 | QC标准 | 周期 |
Step1:蛋白表达 | (1) 密码子优化+基因模板合成+表达载体构建； (2) 质粒抽提+转染（哺乳表达系统）目的蛋白检测（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表达放大+蛋白亲和纯化； | 交付：表达载体，克隆甘油菌，重组蛋白3-3.5mg，纯度>85%，标准实验报告
| 4-6周 |
Step2:动物免疫 | (1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针； (2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价； (3) 若第4针血清抗体效价（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫； (4) 效价合格，采血分离单核细胞； | 动物：背景清晰（年龄，性别，防疫情况）； 免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104； 采血：数量100ml以上； PBMC细胞：>105/vial
| 8-10周 |
Step3:模板cDNA制备 | (1) PBMC总RNA提取（RNA提取试剂盒） (2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒） | cDNA：反转后>1ug/ul，胶图分布均匀； cDNA模板总量>150ug； | 1 天 |
Step4:噬菌体展示文库构建 | (1) 以cDNA为模板，两轮PCR扩增VHH基因 酵母表达质粒构建与转化： VHH基因拼接酵母展示载体，电击转化酵母宿主菌，构建抗体库，电击次数不低于10次 鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+PCR鉴定多样性+插入率 | 文库阳性率：>90%； 文库插入性率：>90%； 库容：>106 | 1-2周 |
Step5:文库筛选（磁珠+Facs） | (1) 磁珠分选； (2) FACS分选（免疫双标分选）； (3) 铺板+阳性克隆菌培养+抗体基因测序；（>20个，多达96个）； | 阳性标准：双阳性菌株； VHH筛选标准：CDR氨基酸序列不同 | 2-3周 |
Step6:抗体验证（体外验证） | (1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量； (2) Elisa验证抗体与抗原结合，进行下游验证（交付EC50数据）; (3) BLI法验证抗体亲和力； (4) 细胞功能验证：流式验证； (5) 验证细胞系（抗原受体过表达细胞系）； | 交付：表达载体，克隆菌株，表达菌株，重组抗体蛋白1mg，纯度90%； 快速亲和力测定结果； | 4-6周 |
█ 服务亮点
--物种适应性较多：人，鼠，兔，羊，羊驼，骆驼，鱼等物种的单抗开发均兼容
--技术平台成熟：提供的1级免疫文库的建库库容为106-107；插入率均满足>95%，筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别
--开发周期短：获得PBMC后，建库到筛选获得抗体序列，3-4周
--产品交付标准高：针对免疫库，交付免疫前后血清，抗体展示文库，酵母表达菌株，抗体序列
--实验记录可追溯：QC质控标准（含RNA提取，cDNA制备等），中英文实验报告，手写实验记录本
