来宝网Logo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

AED
现在位置首页>实验室原料试剂耗材>生化试剂>细胞生物学用试剂>FastCut™ BstBI快速限制性内切酶 15050ES60
FastCut™ BstBI快速限制性内切酶  15050ES60
FastCut™ BstBI快速限制性内切酶  15050ES60
  • FastCut™ BstBI快速限制性内切酶  15050ES60

FastCut™ BstBI快速限制性内切酶 15050ES60

产品报价:165元

更新时间:2024/3/11 13:18:23

地:上海

牌:YEASEN

号:15050ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司

产品关键词: FastCut™ BstBI快速限制性内切酶   FastCut™ BstBI快速限制性内切酶   FastCut™ BstBI快速限制性内切酶   FastCut™ BstBI快速限制性内切酶  

438
访问人数
0
累计评论


翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)

(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)


识别位置

5'-TTCGAA-3'

3'-AAGCTT-5'


产品信息


 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

FastCut? BstBI快速限制性内切酶

15050ES60

100 T

165.00

 

产品描述

 

FastCut?系列内切酶是通过基因工程重组技术,可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶,适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FastCut?系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应,另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

 

产品组分

 

组分编号

组分名称

产品规格

15050-A

FastCut? BstBI

100 μL

15050-B

10×FastCut? Buffer

1 mL

15050-C

10×FastCut? Color Buffer

1 mL

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。-20°C保存,有效期2年。

 

识别位置

 

5'-TT↓CGAA-3'

3'-AAGC↑TT-5'

 

推荐反应条件

 

1× FastCut? 缓冲液;

37°C孵育。

 

失活条件

 

80°C孵育20 min。

 

注意事项

 

1)3 h孵育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性;

2)受CpG甲基化影响,序列完全重叠,剪切阻断;

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作;

4)本产品仅作科研用途!


质量控制

 

1. 功能活性检测:反应温度下,在20 μL反应中,1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λ DNA。

2. 超长时间孵育检测:反应温度下,将1 μL酶与1 μg λ DNA共孵育3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,但延长孵育时间可能出现星号活性。

3. 酶切-连接-再酶切检测:反应温度下,使用1 μL酶消化底物,回收酶切产物,在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

4. 非特异性内切酶活性检测:反应温度下,将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

5. 蓝白斑检测:将含有单一lacZα基因的载体以1 μL酶消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于FastCut?系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。

 

使用方法

 

1. DNA快速酶切流程

1)按如下建议的加样顺序配制反应液(冰上操作):

组分

质粒DNA

PCR产物

基因组DNA

ddH2O

15 μL

16 μL

30 μL

10×FastCut? Buffer或10×FastCut? Color Buffer

μL

3 μL*

5 μL

底物DNA

μL(~1 μg)

10 μL (~0.2 μg)

10 μL (5 μg)

FastCut? BstBI

μL

1 μL

5 μL

Total

20 μL

30 μL

50 μL

*本指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×FastCut TM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验,酶切前需纯化PCR产物。

2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3)37°C孵育15 min(质粒),或15~30 min(PCR 产物),或30~60 min(基因组 DNA)。

4)80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。

2. 双酶切或多酶切

1)每种内切酶的用量为1 μL,并根据需要适当扩大反应。

2)所有内切酶的体积总和不得超过总反应的1/10。

3)如果选用的几种内切酶的反应温度不同,应先以温度低的酶开始酶切,再添加温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。

3.质粒的扩大反应

组分

体积(20 μL)

体积(20 μL)

体积(50 μL)

DNA

1 μg

2 μg

5 μg

FastCut? BstBI

μL

2 μL

5 μL

10×FastCut? Buffer或10×FastCut? Color Buffer

μL

2 μL

5 μL

Total

20 μL

20 μL

50 μL

【注】:如果总反应大于20 μL,可使用水浴、金属浴或沙浴,并增加孵育时间。

 

不同DNA中的识别位点数

 

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

7

0

0

0

0

0

0

1

 

甲基化修饰影响

 

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

无影响

序列完全重叠

剪切阻断

无影响

无影响

 

不同反应缓冲液中的活性

 

反应缓冲液

FastCut?

Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart? Buffer

Takara

QuickCut? Buffer

活性

完全兼容

完全兼容

完全兼容

完全兼容

【注】:活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应下的检测。

 

同裂酶

 

AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI

【注】:同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

 

相关产品

 

产品名称

货号

规格

Top10化学感受态细胞

11801ES80

10×100 μL

DH5α化学感受态细胞

11802ES80

10×100 μL

Hieff Canace? Gold 高保真DNA聚合酶

10148ES60

100 U

2×Hieff Canace? Gold 高保真酶预混液

10149ES03

1 mL

Hieff Clone? 多片段一步法快速克隆试剂盒

10912ES10

10 T

Hieff Clone? Universal One Step Cloning Kit 通用型一步法快速克隆试剂盒

10922ES20

20 T

Hieff MutTM 定点突变试剂盒

11003ES10

10 T

 

HB220107

 


翌圣生物科技(上海)股份有限公司

| 第17

手机:13916792673

联系人:翌圣生物科技(上海)股份有限公司

电话:400-6111-883

传真:021-34615995

QQ:4006111883

(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)