KehongLab无细胞蛋白表达服务

一、KehongLab无细胞蛋白表达技术内容

1.两种无细胞蛋白表达方式
1.1透析式无细胞重组蛋白表达系统：用户需要将模板DNA，细胞提取液和其他必须的组分混合在一起放入透析袋内，并放入特定的缓冲液中。缓冲液中的小分子，包括氨基酸，核苷酸，ATP和其他因子会与透析袋内的小分子进行交换，促进和提高蛋白质产量。
1.2非透析式无细胞重组蛋白表达系统：不需透析系统，可直接将模板DNA与蛋白表达所需大分子及小分子混合，该系统更便于快速操作，但蛋白质产量小于上面所述的透析系统。下图解释了一个透析式细胞外蛋白表达反应的基本设置 。
 

透析式无细胞重组蛋白表达反应示意图
2.无细胞重组蛋白表达模板特点
KehongLab无细胞蛋白表达服务中的DNA模板可以是Z-PCR产物或DNA质粒。该DNA模板（如下图所示）需要包含一个T7启动子(T7 promoter)，核糖体结合位点（RBS;位于ATG起始密码子上游7–11核酸的位置），ATG起始密码子(ATG start codon)，终止密码子(stop codon)和一个T7终止子(T7 terminator)。

该体系特别适用于大量表达一些传统的细胞内体系无法表达的蛋白，例如：对宿主细胞有毒性的蛋白以及膜蛋白等。

二、技术优势
●批量/高通量表达；
●可引入非天然氨基酸；
●高得率（可达10mg/ml)；
●折叠结构正确均一；
●表达特异性蛋白；
●蛋白表达最快只需 6 小时；
●操作简单 可控性高
●一站式纯化服务。

三、应用范围
●膜蛋白的表达；
●同位素标记蛋白和非天然氨基酸标记蛋白的表达；
●毒性蛋白表达；
●高通量蛋白质表达。
该高通量系统还可以与质谱、核磁共振、蛋白结晶、生化反应等下游分析手段结合，不仅可以缩短实验时间，还将让您在较短的时间内得到更多的实验数据。由于其无可比拟的优势，不同领域的研究人员已经在用它表达抗体药物，同位素标记蛋白质和非天然氨基酸标记蛋白质，并不断发表高质量的科学论著。

四、结果分析图例
 
A: SDS-PAGE（10%）对目标蛋白的凝胶分析图；
1：为未离心过的无细胞反应样品；
2：为离心后的上清液样品；
M：为 LMW 蛋白标准样；
→：为过量表达的人碳酸酐酶；
B: 15N标记的人碳酸酐酶的15N-HSQC核磁共振谱图。

五、KehongLab无细胞蛋白表达服务流程
本公司收到质粒当天或次日即开始微量蛋白表达实验；如采用无细胞蛋白表达系统， 最快两日内即可获得表达实验结果并生成实验结果报告。  
 

服务流程
●微量蛋白表达(30 ul反应体系）
●批量蛋白表达（最快2天即可获得目的蛋白）
●高通量蛋白表达(—万种不同蛋白， 最短只需一个月)