动物组织直接PCR试剂盒10184ES50

产品信息

产品描述

动物组织直接 PCR 试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行 PCR 扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强、操作简易。

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组 DNA，如昆虫足翅、鼠尾、 鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于 DNA 提取纯化、也可以直接用于 PCR 反应、也可以在 -20℃ 或以下温度条件下长期保存备用。

本试剂盒中提供的 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性，不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为 2 倍浓缩 PCR 反应混合液，包含了用于 PCR 扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化扩增步骤的操作过程，降低污染机率。

该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。

产品组分

a）Lysis Buffer 和 Proteases 两种组分配合使用于动物组织裂解。

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 扩增所需要的热启动 Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等；已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂， PCR 产物可以直接进行电泳。

c）5 × PCR Enhancer ：高GC含量扩增（如大于65%）时，建议使用5 × PCR Enhancer。

运输方法

冰袋运输，有效期1年。

保存方式

1. 试剂 10184-A【Lysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液，建议保存于2-8℃。 

2. 试剂 10184-B【Proteases】为动物组织裂解剂，使用时请勿长久开盖，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

3. 试剂 10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

4. 试剂 10184-D【5 × PCR Enhancer】，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

操作方法

1. 在离心管中加入 200 μL Lysis Buffer和2 μL Proteases，轻轻涡旋混匀。

2. 取约 10 mg（长度2 mm左右）动物组织，置于上述离心管中，轻轻涡旋混匀。

3. 55℃孵育5-30 min，然后 95℃处理5 min。 

4. 12000 rpm 离心2 min。

5. 将上清转移至新的离心管，-20℃保存或直接用于 PCR 扩增。

【注】

a）Lysis Buffer 与 Proteases 混合后尽快使用，不宜长期保存；大量样本操作时，可以将 Lysis Buffer 与 Proteases 按 100 μL:1 μL 的比例混匀备用。 

b）组织应取少量并尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。各组织推荐使用量：鼠尾：长度2-4 mm；鼠趾：1-4个；鼠脏器、脑：直径2-4 mm；斑马鱼、线虫、果蝇等昆虫组织：1-4个；细胞数量:10⁵-10⁸个。斑马鱼、线虫、果蝇等较小样本的组织，可适当减少Lysis Buffer至50-100 μL。昆虫等外壳坚硬的样本，建议剪碎样本并增加Proteases至4 μL。

c）55℃孵育，一般 5 min 即可满足多数 PCR 需求，如鼠尾、鼠耳等组织；若需要的 DNA 量较大或样品较难裂解，可将时间延长至 30 min 或更久；裂解时间可在5-30 min之间调整，组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议总体系的5-20%之间，避免超过总体系的20%。

b）引物终浓度：反应性能较差时，推荐在 0.1- 0.5 μM 范围内调整引物浓度。

c）反应体系：推荐使用 20 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

PCR反应鉴定- PCR反应条件

*退火温度：请参考引物的理论 Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值5℃，或通过梯度 PCR 确定最佳温度。  

注意事项：

1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响 PCR 效率。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。

常见问题与解决方法

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