产品报价：1493元
更新时间：2024/3/11 13:18:23
产地：上海
品牌：翌圣生物
型号：12611ES02
厂商性质： 生产型,贸易型,服务型,
公司名称： 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)
（联系我时，请说明是在来宝网上看到的，谢谢！）Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina?
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina? Set1 | 12611ES02 | 48×2 T | 1493.00 |
Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina? Set2 | 12612ES02 | 48×2 T | 1493.00 |
Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina?是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含48种Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96种Index Primer，适用于Illumina?高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
编号 | 名称 | 规格 |
12611ES02 | PE Adapter | 336 μL |
Universal Primer | 240 μL | |
Index Primer 1-48 | 5 μL each | |
12612ES02 | PE Adapter | 336 μL |
Universal Primer | 240 μL | |
Index Primer 49-96 | 5 μL each |
冰袋运输。
所有组分-20°C保存，有效期1年。
1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。
3. 本试剂盒每个Set包含48种Index Primer，每种Index Primer可以构建2个DNA文库，每个Set可以构建96个DNA文库。
4. 切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。
5. 使用Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina?试剂盒构建的DNA文库结构如下：
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina? 试剂盒操作说明进行。
接头连接（Adapter Ligation）：
在末端修复产物两端连接特定的Illumina?接头，即Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?操作步骤3.2。
1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；
表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩尔比 | 推荐Adapter(15 μM)使用量 |
400 ng | 30:1 | 3.5 μL |
300 ng | 40:1 | 3.5 μL |
200 ng | 60:1 | 3.5 μL |
100 ng | 100:1 | 3.0 μL |
50 ng | 100:1 | 1.5 μL |
【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]
2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
3. 配制表2所示反应体系；
表2. Adapter Ligation反应体系
名称 | 体积（μL） |
dA-tailed DNA | 60 |
Ligation Enhancer | 30* |
Quick T4 DNA Ligase | 5 |
PE Adapter | x** |
ddH2O | 5-x |
【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。
**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。
4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：
表3. Adapter Ligation反应程序
温度 | 时间 |
热盖 | Off |
20°C | 15 min |
4°C | Hold |
【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。
连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up）
该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?建库试剂盒说明书。
文库扩增（Library Amplification）
该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；
1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；
表4. PCR扩增反应体系
名称 | 体积（μL） |
2× Super Canace?ⅡHigh-Fidelity Mix | 25 |
Universal Primer | 2.5 |
Index Primer | 2.5 |
Adapter Ligated DNA | 20 |
【注】：文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）。
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表5所示反应程序，进行PCR扩增。
表5. PCR扩增反应程序
温度 | 时间 | 循环数 |
98°C | 1 min | 1 |
98°C | 10 sec | 根据实验需要调整 |
60°C | 30 sec | |
72°C | 30 sec | |
72°C | 5 min | 1 |
4°C | Hold | - |
PE Adapter for Illumina：
5′-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTC -3′
5′-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3′
Universal Primer for Illumina：
5′-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3′
Index Primer for Illumina：
5′-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3′
xxxxxxxx表示8 bp 的Index序列，各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示：
Index Primer名称 | 引物中Index序列 | 测序对应Index序列 | Index Primer名称 | 引物中Index序列 | 测序对应Index序列 |
Index Primer 1 | ATCACGTT | AACGTGAT | Index Primer 25 | TGCGATCT | AGATCGCA |
Index Primer 2 | CGATGTTT | AAACATCG | Index Primer 26 | TTCCTGCT | AGCAGGAA |
Index Primer 3 | TTAGGCAT | ATGCCTAA | Index Primer 27 | TAGTGACT | AGTCACTA |
Index Primer 4 | TGACCACT | AGTGGTCA | Index Primer 28 | TACAGGAT | ATCCTGTA |
Index Primer 5 | ACAGTGGT | ACCACTGT | Index Primer 29 | TCCTCAAT | ATTGAGGA |
Index Primer 6 | GCCAATGT | ACATTGGC | Index Primer 30 | TGTGGTTG | CAACCACA |
Index Primer 7 | CAGATCTG | CAGATCTG | Index Primer 31 | TACTAGTC | GACTAGTA |
Index Primer 8 | ACTTGATG | CATCAAGT | Index Primer 32 | TTCCATTG | CAATGGAA |
Index Primer 9 | GATCAGCG | CGCTGATC | Index Primer 33 | TCGAAGTG | CACTTCGA |
Index Primer 10 | TAGCTTGT | ACAAGCTA | Index Primer 34 | TAACGCTG | CAGCGTTA |
Index Primer 11 | GGCTACAG | CTGTAGCC | Index Primer 35 | TTGGTATG | CATACCAA |
Index Primer 12 | CTTGTACT | AGTACAAG | Index Primer 36 | TGAACTGG | CCAGTTCA |
Index Primer 13 | TGGTTGTT | AACAACCA | Index Primer 37 | TACTTCGG | CCGAAGTA |
Index Primer 14 | TCTCGGTT | AACCGAGA | Index Primer 38 | TCTCACGG | CCGTGAGA |
Index Primer名称 | 引物中 Index序列 | 测序对应Index序列 | Index Primer名称 | 引物中Index序列 | 测序对应Index序列 |
Index Primer 15 | TAAGCGTT | AACGCTTA | Index Primer 39 | TCAGGAGG | CCTCCTGA |
Index Primer 16 | TCCGTCTT | AAGACGGA | Index Primer 40 | TAAGTTCG | CGAACTTA |
Index Primer 17 | TGTACCTT | AAGGTACA | Index Primer 41 | TCCAGTCG | CGACTGGA |
Index Primer 18 | TTCTGTGT | ACACAGAA | Index Primer 42 | TGTATGCG | CGCATACA |
Index Primer 19 | TCTGCTGT | ACAGCAGA | Index Primer 43 | TCATTGAG | CTCAATGA |
Index Primer 20 | TTGGAGGT | ACCTCCAA | Index Primer 44 | TGGCTCAG | CTGAGCCA |
Index Primer 21 | TCGAGCGT | ACGCTCGA | Index Primer 45 | TATGCCAG | CTGGCATA |
Index Primer 22 | TGATACGT | ACGTATCA | Index Primer 46 | TCAGATTC | GAATCTGA |
Index Primer 23 | TGCATAGT | ACTATGCA | Index Primer 47 | TAGTCTTG | CAAGACTA |
Index Primer 24 | TTGACTCT | AGAGTCAA | Index Primer 48 | TTCAGCTC | GAGCTGAA |
Index Primer名称 | 引物中 Index序列 | 测序对应Index序列 | Index Primer名称 | 引物中Index序列 | 测序对应Index序列 |
Index Primer 49 | TGTCTATC | GATAGACA | Index Primer 73 | GCAACATT | AATGTTGC |
Index Primer 50 | TATGTGGC | GCCACATA | Index Primer 74 | GGTCGTGT | ACACGACC |
Index Primer 51 | TTACTCGC | GCGAGTAA | Index Primer 75 | GAATCTGT | ACAGATTC |
Index Primer 52 | TCGTTAGC | GCTAACGA | Index Primer 76 | GTACATCT | AGATGTAC |
Index Primer 53 | TACCGAGC | GCTCGGTA | Index Primer 77 | GAGGTGCT | AGCACCTC |
Index Primer 54 | TGTTCTCC | GGAGAACA | Index Primer 78 | GCATGGCT | AGCCATGC |
Index Primer 55 | TTCGCACC | GGTGCGAA | Index Primer 79 | GTTAGCCT | AGGCTAAC |
Index Primer 56 | TTGCGTAC | GTACGCAA | Index Primer 80 | GTCGCTAT | ATAGCGAC |
Index Primer 57 | TCTACGAC | GTCGTAGA | Index Primer 81 | GGAATGAT | ATCATTCC |
Index Primer 58 | TGACAGAC | GTCTGTCA | Index Primer 82 | GAGCCAAT | ATTGGCTC |
Index Primer 59 | TAGAACAC | GTGTTCTA | Index Primer 83 | GCTCCTTG | CAAGGAGC |
Index Primer 60 | TCATCCTA | TAGGATGA | Index Primer 84 | GTAAGGTG | CACCTTAC |
Index Primer 61 | TGCTGATA | TATCAGCA | Index Primer 85 | GAGGATGG | CCATCCTC |
Index Primer 62 | TAGACGGA | TCCGTCTA | Index Primer 86 | GTTGTCGG | CCGACAAC |
Index Primer 63 | TGTGAAGA | TCTTCACA | Index Primer 87 | GGATTAGG | CCTAATCC |
Index Primer 64 | TCTCTTCA | TGAAGAGA | Index Primer 88 | GATAGAGG | CCTCTATC |
Index Primer 65 | TTGTTCCA | TGGAACAA | Index Primer 89 | GTGTGTCG | CGACACAC |
Index Primer 66 | TGAAGCCA | TGGCTTCA | Index Primer 90 | GCAATCCG | CGGATTGC |
Index Primer 67 | TACCACCA | TGGTGGTA | Index Primer 91 | GACCTTAG | CTAAGGTC |
Index Primer 68 | TGCGTGAA | TTCACGCA | Index Primer 92 | GCCTGTTC | GAACAGGC |
Index Primer 69 | GGTGAGTT | AACTCACC | Index Primer 93 | GCACTGTC | GACAGTGC |
Index Primer 70 | GATCTCTT | AAGAGATC | Index Primer 94 | GCTAACTC | GAGTTAGC |
Index Primer 71 | GTGTCCTT | AAGGACAC | Index Primer 95 | GATTCATC | GATGAATC |
Index Primer 72 | GACGGATT | AATCCGTC | Index Primer 96 | GTCTTGGC | GCCAAGAC |
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