Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit 11145ES50
产品报价:1126元
更新时间:2024/2/18 11:44:54
产地:上海
品牌:翌圣生物
型号:11145ES50
厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,
公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)
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(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit | 11145ES50 | 50 T | 1126.00 |
Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit | 11145ES70 | 200 T | 4126.00 |
产品描述
Hifair? Ⅲ One Step qRT-PCR Probe Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,利用耐热Hifair? Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并搭配使用探针和UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase,配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。
本试剂盒以预混的Mix形式提供,2×Hifair? Ⅲ P buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等,优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适用于荧光标记探针的高特异性检测系统。此外,Hifair? UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair? Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase等。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
11145ES50 (50 T) | 11145ES70 (200 T) | ||
11145-A | 2×Hifair? Ⅲ P buffer | 500 μL | 1 mL×2 |
11145-B | Hifair? UH Ⅲ Enzymes | 50 μL | 200 μL |
11145-C | Hieff?50×High Rox | 20 μL | 80 μL |
11145-D | Hieff? 50×Low Rox | 20 μL | 80 μL |
11145-E | RNase free ddH2O | 500 μL | 1 mL×2 |
【注】P buffer为Probe buffer的简写,UH为UNICON-Hifair的简写。
适用机型
High Rox适用机型: ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne?, StepOne Plus?
Low Rox 适用机型: ABI 7500, 7500 Fast, ViiA?7, QuantStudio? 3 and 5, QuantStudio? 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P?, MX3005P?, MX4000P?
不需要Rox校正的仪器型号:
Bio-Rad CFX96?, CFX384?, iCycler iQ?, iQ?5, MyiQ?, MiniOpticon?, Opticon?, Opticon? 2, Chromo4?
Eppendorf Mastercycler? ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene? Q, Rotor-Gene? 3000, Rotor-Gene? 6000
Roche Applied Science LightCycler? 480, LightCycler? 2.0; Lightcycler? 96
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler?; Illumina Eco qPCR
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光保存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
反应体系(以20 μL为例)
组分 | 加入量 | 终浓度 |
2×Hifair? Ⅲ P buffer | 10 μL | 1× |
Hifair? UH Ⅲ Enzymes | 1 μL | - |
Hieff? 50×High Rox or Low Rox | 0.4 μL | - |
Gene Specific Primer Forward (10 μM) | 0.4 μL | 0.2 μM |
Gene Specific Primer Reverse (10 μM) | 0.4 μL | 0.2 μM |
TaqMan Probe (10 μM) | 0.2 μL | 0.1 μM |
模板RNA | Total RNA: 1 pg-1 μg | - |
RNase free ddH2O | to 20 μL | - |
【注】:a) 所有试剂使用前应充分混匀。
b) 参比染料:Rox的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】。
c) 引物浓度:通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
d) 探针浓度:探针终浓度可在50 nM-250 nM之间调整。
e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
f) 模板稀释:一步法qRT-PCR灵敏度极高,推荐将模板稀释后(如稀释至2-5 μL/样本)加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性。
g) 反应体系:建议以大体系进行实验,如20 μL或50 μL。
标准扩增程序
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 |
1 | 逆转录 | 50℃a | 15 minb | 1 |
2 | 预变性 | 95℃ | 30 sec | 1 |
3 | 扩增反应 | 95℃ | 10 sec | 45 cycles |
60℃ | 30 secc |
【注】 a) 对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度提高到55℃,有助于提升扩增效率和灵敏度。
b) 逆转录时间可以根据模板的复杂程度进行调整,时间为5min时可满足大多数基因的鉴定。
c) 不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。
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