R2A琼脂培养基用于纯化水中菌落总数的测定,(EP、USP、Chp标准)
配方:
酵母浸出粉 0.5
蛋白胨 0.5
酪蛋白水解物 0.5
葡萄糖 0.5
可溶性淀粉 0.5
磷酸氢二钾 0.3
无水硫酸镁 0.024
琼脂 15.0
pH值7.2 ± 0.2 25℃
调整PH值,使得R2A琼脂灭菌后的PH值为7.2±0.2。使用高压锅,121°C下高压灭菌15分钟。
不同药典关于纯化水的微生物检测方法和质量标准
中国药典
【检查】 微生物限度 取本品不少于 1ml,按薄膜过滤法处理后,采用 R2A 琼脂培养基,30~35℃培养不少于 5 天,依法检查(通则 1105),每1ml 供试品中需氧菌总数不得过 100cfu。
操作简述:
除葡萄糖、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节 pH 值使加热后在 25℃的 pH值为 7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入葡萄糖,摇匀,分装,灭菌。 R2A 琼脂培养基适用性检查试验 照通则 1105 中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行,试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。应符合规定。
USP标准
在美国药典中,推荐使用0.45μm薄膜过滤法,并同时使用高营养培养基(平板计数琼脂培养基(PCA))于30-35℃培养72小时以上,和低营养培养基(R2A琼脂)于20-25℃培养96小时以上。检测标准为:≤100cfu/ml 。
操作简述:(可根据实际情况调整)
量取10ml充分混匀的水样,以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内,过滤。并用 pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100ml,共冲洗1次。过滤后,取出滤膜,正面朝上贴于琼脂平板上。共制备 2张滤膜,一张滤膜贴于平板计数琼脂培养基平板(高营养培养基)置30℃~35℃生化培养箱中倒置培养2~3天,计数。另一张滤膜贴于R2A琼脂平板(低营养培奍基),置20℃~25℃生化培养箱倒置培养5~7天,计数。以培养基平板上菌落数生长较多者作为检测结果, 按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。
EP标准
在欧洲药典中使用薄膜过滤法(0.45μm 孔径滤膜),使用 R2A 琼脂培养基在 30℃~35℃培养 5 天以上。 质量标准:≤100cfu/mL。
操作简述:(可根据实际情况训整)
量取 10ml 充分混匀的水样,以无菌操作加入 安装好的薄膜过滤器内,过滤。并用 pH7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜 每次冲洗量为 100ml,共冲洗 1 次。过滤后,取出滤膜,正面朝上贴于 R2A 琼脂平板上, 置 30℃~35℃生化培养箱中倒置培养 5 天,计数。按比例折算为 1ml 纯化水中的微生物数量后 报告。