1．产品概述
REAGEN 叶酸检测试剂盒操作简易，基于国标GB5413.16-2010研制。利用微生物方法，用于定量检测食品、药品和动物饲料中的叶酸总量（包括添加和原生叶酸）。所有所需的试剂均包含在试剂盒中。本试剂盒共能提供96次检测（包括标准品）,使用酶标仪 （610 - 630 nm 或者540 - 550 nm）进行读数。这个 叶酸检测试剂盒相比市面上已有试剂盒具有以下特点：
l 样品前处理更加简便，能与其他维生素项目同时进行测定
l 试剂盒配备质控物质，利于实验质量
l 试剂盒配备各浓度标准品，实验过程无需另外配制
l 试剂盒稳定，高重复、高回收率。
2．试剂盒原理
叶酸是从样品稀释提取所获得的。将稀释了的提取物和叶酸检测培养基加入包被有Lactobacillus rhamnosus的微孔中。Lactobacillus rhamnosus的生长状况取决于叶酸的含量。添加叶酸作为标准或者作为样品混合物，细菌会一直生长直至生物素被消耗殆尽。孵育条件应为黑暗、37 °C条件下孵育44 - 48小时。细菌生长时新陈代谢的强度和叶酸的含量形成关系并可以绘制称成标准曲线，最后通过酶标仪在610 - 630 nm （或者540 - 550 nm）读取结果。
3、试剂盒组成
组成 | 规格 | 数量 |
微孔板 | 96孔，包被有德氏乳杆菌 | 1板 |
无菌水 | 30ml/瓶，用于培养基和标 准品制备及样品提取物稀 释 | 3瓶 |
叶酸检测试剂盒培养基 | 固体 | 3瓶 |
叶酸缓冲液 | 液体 | 3瓶 |
叶酸标准品 | 固体 | 3瓶 |
粘合片 | 整片 | 2片 |
4、所需其他试剂及设备（不包含在试剂盒中）
1) 无菌操作台
2) 微孔板读数仪：610-630nm 或540-550nm
3) 培养箱：带暗室，37℃
4) 水浴锅：95℃
5) pH 计
6) 离心机：8000g
7) 无菌枪头：20-200μL；100-1000μL
8) 无菌离心管：带螺帽，15 和50mL
9) 无菌反应管：1.5 或2.0mL
10) 玻璃瓶：500mL
11) 容量瓶：100和1000mL
12) 烧杯：100mL
13) 无菌注射器和0.2μm 无菌滤膜
14) 无菌水或去离子水
15) NaOH：2mol/L，8g NaOH 溶于100ml 无菌水或去离子水中
16) NaOH：1mol/L 和0.1mol/L
17) 磷酸盐缓冲液（0.05 mol/L，pH7.2）：将7.8g 磷酸二氢钠加入1L无菌水或去离子水中，调 节pH 至7.2，缓冲液需当天制备。
18) 猪胰腺
19) 鸡胰腺
检测步骤
注：加入微孔板中的样品必须为无菌样品（使用试剂盒中提供的无菌水进行稀释）。
1) 取出所需数量的微孔条置于微孔架上，将剩余微孔板条放回含干燥剂的铝箔袋中密封，2-8℃储 存。
2) 依次将150μl 叶酸培养基、150μl 标准品或样品加入微孔中，用粘合箔盖住微孔条或微孔（揭
开粘合箔的保护层，用手或压舌板将粘合箔平压，使其充分封闭微孔板条）。
3) 在细菌培养器中，37℃避光孵育44-48小时。
4) 再次挤压粘合箔，将微孔板放置在桌面上，在桌面上来回振荡，使微生物溶解在培养基中。
5) 小心揭开粘合箔：用一只手将微孔条固定于微孔架上，另一只手沿对角揭开粘合箔。
6) 使用移液枪头或针破坏微孔中液体表面的泡沫。
7) 用酶标仪在610-630nm（或540-550nm）下测量浑浊度。注：孵育完成后，微孔板可在冰箱中保存最长48h，然后用酶标仪读数；为避免周末或假期带来的影响，可在60h后读数，建议开启培养箱的定时器，在44-48h后自动关闭培养箱。
