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GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)20508ES10
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)20508ES10
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GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)20508ES10

产品报价:1238元

更新时间:2024/2/26 10:08:23

地:上海

牌:Yeasen

号:20508ES10

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司

产品关键词: 本品特异性好   可以一步纯化各种表达系统中谷   性价比高  

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翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)

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GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

储存

价格(元)

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF

谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)

20508ES10

10ml

4

1238.00

20508ES50

50ml

4

4568.00

20508ES60

100ml

4

7928.00

产品描述

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂,结构上是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。

此外,本品特异性好,性价比高,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。

产品性质

基质(Matrix

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand

通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽

孔径(Bead size

45-165μm

载量(Capacity

10mg GST protein/ml 基质(40kDa

最大压力(PressureMax

0.3 MPa, 3bar

pH稳定范围(pH range

3-12

储存缓冲液(Buffer

20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4保存,有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm0.45μm滤膜过滤除菌。

结合/洗杂缓冲液PBSpH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH7.4)

洗脱缓冲液50mM Tris-HCl, 10mM 还原型谷胱甘肽,pH 8.0

【注】:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10mM DTT

 使用方法

【注】样品在上样前最好用0.22μm0.45μm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。

1 GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的装填(适用于各种中压色谱层析柱的填装)

1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。

4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速, 这样可避免液压对所形成柱床的冲击,避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。

【注】:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%,当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5)关闭泵,关闭层析柱出口。

6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。

7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。

8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

样品纯化

1平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

2上样Resin平衡后,加入蛋白样品,使其与Resin充分接触,提高目的蛋白回收率,收集流出液。

3洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

4洗脱:使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液,收集洗脱液,即目的蛋白溶液。

5清洗与保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于4保存,防止填料被细菌污染。

3 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。

1)去除一些沉淀或变形物质

2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2GSTSep Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

3)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗树脂。

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22μm0.45μm滤膜过滤,或离心去除。

样品太黏稠

样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5μg/ml),Mg2+(终浓度1mM),冰上孵育10-15min

缓冲液太黏稠

有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。

洗脱组分中无目的蛋白

GST标签蛋白变性了

使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。

过度的裂解使目的蛋白变性

目的蛋白聚集产生沉淀

在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1-10mM

融合蛋白改变了GST的构象,影响了目的蛋白的结合力

测定pGEXGST的结合力,对载体进行超声处理,检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力,有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力。

降低结合温度至4,充分清洗。

柱子平衡时间太短,目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范围内结合

pH6.5-pH8.0buffer进行充分的平衡,如PBS.

目的蛋白没有完全洗脱下来

洗脱体积太少

增加洗脱液体积,减小洗脱流速。

洗脱液中谷胱甘肽浓度太低

增加洗脱液中谷胱甘肽浓度,可尝试用50mM Tris-HCl, 20-40mM还原型谷胱甘肽pH8.0洗脱

pH影响洗脱

在不增加洗脱液中谷胱甘肽量时,提高洗脱液中pHpH8-9会有改善

增加洗脱液中离子强度,如0.1-0.2M NaCl

洗脱液中谷胱甘肽被氧化

使用新鲜配制的洗脱液

加入DTT

非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱

洗脱液中加入非离子型洗涤剂,如0.1%Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20

电泳或western blot检测中发现多条带

Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来

Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物,可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl, 2mM ATP, 10mM MgSO4, pH 7.437加热10min去除。

可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白

GST融合蛋白已经发生降解

在裂解液中加入蛋白酶抑制剂,如加入1 mM PMSF

可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的,可使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-ompT

细胞破碎过度

减少细胞破碎时间,超声前加入溶菌酶(菌液体积的0.110mg/ml溶菌酶,25mM Tris-HClpH8.0),避免发泡导致蛋白酶变性,过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。

共价共纯化

包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化,如:DnaK(Mr70000), DnaJ(Mr37000), GrpE(Mr 40000), GroEL(Mr57000), GroES(Mr10000)

抗体与E. coli的各种蛋

白反应

抗体吸附E. coli蛋白:GST-抗体;超声处理去除GST抗体,可以用Western Blot检测

 

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产品名称

规格

价格

20507ES10

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

10ml

928.00

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GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

50ml

3848.00

20507ES60

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

100ml

6898.00

20508ES10

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10ml

1238.00

20508ES50

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50ml

4568.00

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100ml

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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5MLGST标签蛋白纯化预装柱,5ML

5ml

938.00

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5×5ml

3928.00

 



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