microRNA qPCR Kits

一、背景：

MicroRNAs（microRNAs）是一种小的内源性非编码RNA分子，大约由21－25个核苷酸组成。这些小的microRNA通常靶向一个或者多个mRNA，通过翻译水平的抑制或断裂靶标mRNAs而调节基因的表达。成熟的microRNA 的形成包含多个步骤。首先，microRNA 基因被转录成命名为pri-microRNA的初级转录物；动物pri-microRNA的第一次剪切位于细胞核内，产生大小为70个核苷酸左右并能形成茎-环结构的microRNA 前体，称为pre-microRNA；第二次剪切位于细胞质中，pre-microRNA被剪切成21-25个核苷酸成熟的microRNA。

MicroRNA 自从1993年首次被报道以来，现已经被发现了3000多种，存在于人类和所有的模式生物中。MicroRNA 通过与mRNA的3’ UTR 结合而介导翻译水平的调控，也可通过与mRNA结合的互补程度决定microRNA将以何种机制发生作用；完全的互补引起与RNAi类似的作用，不完全互补则导致翻译抑制作用。因此，研究microRNA对于深入探讨生命现象的本质，解释细胞行为和疾病发生机制，具有重要的理论意义；对于疾病的诊断、治疗和预防具有潜在的实际应用价值。

关于microRNA:

图１，pre-microRNA 和 microRNA 示意图  

二、BioTNT microRNA qPCR(茎环法)引物试剂盒

microRNA由于长度太短，一般难以检测。 BioTNT 研发 microRNA qPCR Detection System ， 是专门用于microRNA 定量检测的系统。

该microRNA检测试剂盒microRNA qRT-PCR Detection Kit包括:

1.应用于microRNA的特异茎环逆转录系统、及其qPCR 反应特异microRNA的引物assay;

2.特异性的茎环逆转录引物和qPCR检测上下游引物;

3.专门的PCR 荧光定量检测系统;

优势：

1. 应用茎环逆转录引物进行逆转录，可以区分成熟的microRNA和Pre microRNA；

2. 应用BioTNT  microRNA qRT-PCR sybgreen Detection Kit，已经优化的适合特异茎环逆转录引物进行CDNA合成的protocol，用于120个microRNA样本的已知第一链CDNA合成；

3. BioTNT 经验证的特异性茎环系统assay 可以提供您最方便的实验方案；采用了120Tests的包装，方便您的实验；

特征：

本方法可以采用经典的trizol法抽提得到的总RNA；

检测的特异性：独特的microRNA茎环逆转录引物的设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-microRNA的污染；

检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的microRNA；

一站式解决方案：BioTNT不仅提供检测的试剂盒，还提供经验证的人源、小鼠源、大鼠源的特异性microRNA assay；

检测灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的microRNA；

说明

1.BioTNT  microRNA qRT-PCR sybgreen Detection Kit已包含有检测所需要的所有试剂, 客户仅需要提供RNA及BioTNT 特异性茎环系统assay即可进行microRNA检测；

2.我们提供的BioTNT 特异性茎环系统assay建议同BioTNT  microRNA qRT-PCR sybgreen Detection Kit配套使用；

3.我们承诺推出的每个BioTNT 特异性茎环系统assay都提供利用BioTNT  microRNA qRT-PCR sybgreen Detection Kit进行验证的报告，其报告内容包括验证流程、引物相应扩增曲线、融解曲线、及其推荐的反应条件, 同时还提供阳性的cDNA验证模板，客户可以参考此条件进行检测实验。

二、BioTNT  microRNA  qPCR(加尾法)检测试剂盒：

示意图：

MicroRNA由于长度太短，一般难以检测。

BioTNT采用在microRNA的 3’末端通过Poly(A)Polymerase，使得microRNA 添加了polyA 尾, 再采用特别设计的biotnt  oligo(dt)- 通用逆转录引物进行逆转录反应，最终生成microRNA对应的cDNA第一链，从而完成了microRNA的逆转录反应 。

microRNA逆转录试剂盒（加尾法）包含microRNA 3’末端Poly(A)修饰过程和逆转录过程的所有试剂,该试剂盒具有高效的Poly(A)修饰和逆转录效率,可从20pg-1ug的总RNA中有效制备microRNA对应的cDNA第一链。

注:该试剂盒须与BioTNT microRNA荧光定量检测试剂盒(A2030A202)配套使用。

说明

该试剂盒中包含microRNA荧光定量检测的所有试剂，包括2×microRNA premix和Reverse primer set。2×microRNA premix是专门为microRNA检测而研发的新一代荧光定量检测试剂， 该检测试剂采用premix预混系统，包含了优化配比的dNTP、增强剂、稳定剂等，且其中的DNA polymerase采用的是新一代化学修饰法的热启动技术，保证高特异性和高灵敏度。

NOTE：加尾法的实验的难点在于，同样的一条QPCR 下游引物，与多达上千种的microRNA 设计出来的上游引物一起配对，会存在以下困难：

1.  TM 值适配的困难；高GC 或者低GC的microRNA 很难设计或者修饰上游引物；

2.  引物二聚体：同一条下游引物必然会与某些上游引物形成比较强的二聚体；

BioTNT 独创加尾法Reverse primer set，为了让您的加尾法QPCR进行得更顺利 ，Biotnt microRNA荧光定量检测试剂盒（加尾法）试剂盒中包括一系列的下游引物（退火温度覆盖10度），方便您优化整体的QPCR实验。

这套加尾法QPCR Reverse primer set 为您提供了较高的上游引物设计灵活度，您的上游引物设计TM 值可以从58度到69度的范围，都能找到适配的下游引物。同时，不同的下游引物与您设计的上游引物进行配对，您可以通过预实验验证，寻找更合适的上游引物和下游引物，适配率高达95%以上。

产品特点：

通量高：可用于从一个合成反应的cDNA中检测多种microRNAs。

特异性：性能优良的化学热启动PCR聚合酶技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增。

保存条件： -20℃避光保存。

适用范围：

对microRNA反转录后的cDNA进行荧光定量PCR检测；

适用于各种类型荧光定量PCR仪

备注：

请与microRNA逆转录试剂盒（加尾法）A2030A201配套使用以达到最佳效果，若使用其它反转录试剂盒获得的cDNA进行检测，请咨询BioTNT客服。

四、microRNA 加尾法引物（验证）引物；

MicroRNAs（microRNAs）是一类由18～25核苷酸组成的非编码单链小分子RNA，具有表达的时序性、序列严格的保守性、组织器官表达量的相对特异性等特点，在细胞分化，生物发育及疾病发生发展过程中发挥巨大作用。

目前microRNA相关研究在迅速增减，为了方便客户，我们推出了microRNA加尾法验证引物。 验证样本microRNA mimics，经过BioTNT microRNA逆转录试剂盒（加尾法）A2030A201合成cDNA后，配合microRNA荧光定量检测试剂盒（加尾法）A2030A202及试剂盒中的下游引物set进行荧光定量验证。BioTNT 为您提供经设计并验证的可用于加尾法实验的引物，包括上游引物（实物），以及提供您最优的下游引物编号，方便您进行整体microRNA QPCR 实验。订购货号为：CUS-PA-microRNA名称。

所有引物规格均为  500次×20ul qPCR体系   

成品均为液体状态10×  统一价格 240元/套