产品描述：
第一链cDNA合成试剂盒(去基因组)是以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。本试剂盒使用NovoScript? Reverse Transcriptase反转录酶（novoprotein目录号：E123），其RNase H活性低于AMV反转录酶，但可耐受42-50°C的温度。试剂盒中含有重组RNA酶抑制剂（novoprotein目录号：E125），可耐受55°C高温，有效防止RNA降解。本制品含有去除基因组的成分gDNA Removal，在以RNA为模板进行cDNA第一链合成时，可以同步去除基因组DNA。反应结束后于85℃加热5秒钟即可失活反转录酶、RNA酶抑制剂和gDNA Removal。
操作方法：
第一链cDNA合成:
融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
按顺序加入下面的反应物
模板RNA 总RNA(0.1 ng -5μg) poly(A) mRNA(10 pg) 特异性RNA(0.01 pg) 引物 Oligo (dT)18 1 μl Random N6 1 μl 基因特异性引物15-20 pmol(0.01 pg) 5×NovoScript?RT Buffer 4μl RNase Inhibitor 1μl gDNA Purge 1μl dNTPs(10mM) 2μl NovoScript? Reverse Transcriptase 1μl RNase Free Water 至20μl 可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的混合液轻柔混匀，短暂离心，于65°C 条件下孵育5分钟后在冰上冷却。
轻柔混匀后离心。
如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物，需在42°C条件下孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物，则要先在25°C条件下孵育5分钟后转为42°C孵育60分钟。
70°C加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20°C可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70°C 保存。
第一链cDNA的PCR扩增:
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。
