NovoScript® Reverse Transcriptase (E123)

本制品是通过基因重组技术克隆表达的缺失突变型RNase H-的M-MuLV反转录酶。一般的野生型M-MuLV（Moloney Murine Leukemia Virus）具有以下几种活性：依赖于RNA的DNA聚合酶活性；依赖于DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由于RNase H能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶的RNase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成，高比例的全长cDNA文库的构建以及Real Time RT-PCR反应等。

• 用DEPC处理实验用到的所有管子和枪头，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。

• 确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。

• 纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯酚，因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。

1.按右侧表格顺序加入的反应物。

2.可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的 混合液轻轻混匀，短暂离心，65°C 孵育5分钟，冰上冷却，离心，再置于冰上冷却。

3. 轻轻混匀，离心。

4. 如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物，42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物，25°C先孵育5分钟，随后42℃孵育60分钟。

5. 75°C加热5 min终止反应。

反应产物可直接用于PCR反应或者在-20°C 保存少于一周的时间。如想延长保存时间，建议使用-70°C 保存。