Pfu DNA 聚合酶 (E002)

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更新时间：2016/8/19 15:47:07

产地：上海

品牌：novoprotein

型号：E002

厂商性质：生产型,

公司名称：近岸蛋白质科技有限公司

产品关键词： DNA聚合酶 3′→5′外切酶(校正)活性高保真 Pfu

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钟明舫 : () (021-50798060)

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产品描述：

本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3′→5′外切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3x10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

产品用途：

用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成，DNA片段的补平等（参见实验方案）。

使用建议：

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3′端"A"突出，其PCR产物的克隆有几种方案。

PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
将产物3′末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
引物中引入15bp与载体同源序列，利用NovoRec? PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat# NR001）直接连接到目的载体。

由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入Pfu酶。

近岸蛋白质科技有限公司

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