Multiplex PCR Kit 多重PCR试剂盒 (E023) 鉴定 高产量

本制品针对多重PCR的高产需求及DNA聚合酶的强聚合能力而优化，可在同一个PCR反应体系中，对多个基因使用多对引物同时进行特异性扩增（最多可加入10对引物）。当引物对较多时，可适当添加HotStart Taq DNA 聚合酶和dNTPs以达到良好的扩增效果。

• 常规PCR鉴定；

• 高产量PCR；

• 高通量PCR；

• 多重PCR；

• 使用本制品时务必将Buffer反复混匀后再加，避免因组分不一导致结果差异；

• 配置和分装反应液时请一定使用新的（无污染的）枪头以避免污染；

• 如扩增条带多，可适当添加酶和dNTPs；

• 当多重 PCR扩增产物的长度均在1 kb以内时，使用 3%～4％浓度的 Agarose gel进行电泳分离效果最佳；

• 尽量减小各引物间的 Tm 值差；

• 目的片段长度尽量在 1 kb以下；

• 引物的长度保持在 22～30 bp，GC含量在50～60%为宜，并避免局部区域GC或AT的含量过高；

• 引物应用于多重PCR前要预先对各目的基因进行扩增，以确认引物的特异性及反应性能；

  
  

• 应用实例：

  
  

  图例一）50μl扩增体系中，以50ngλDNA为模板，对长度范围在100-800bp之间的片段的扩增结果。

  泳道M：DL2000 DNA Marker；泳道1,泳道2：使用7对不同引物同时扩增的结果
• 保存温度：

  -20 ℃

  产品包装（A包装）：

  产品组成	体积
  5×Multiplex PCR Buffer（5U/μl）	1ml
  HotStart Taq DNA聚合酶（5U/μl）	100μl
  dNTPs（10mM）	250μl

  常用反应体系（50μl）：

  5×Multiplex PCR Buffer	10μl
  上游引物*n	0.2-1.0μM（终浓度）
  下游引物*n	0.2-1.0μM（终浓度）
  模板	50ng
  dNTPs	1.5μl
  HotStart Taq DNA聚合酶	1μl
  ddH2O	至50μl

  常用PCR循环：

  当扩增片段<3K：
  94 ℃	5min
  30次循环	94℃，20s
  	57℃,20秒
  	72℃,根据产物长度调整，1 kb/min
  72℃	5min
  4℃	保温

  常见问题及解答：

• 没有扩增产物或量少：保证每一管的引物，buffer，酶等已全部加入；使用高质量的引物，并检测引物是否降解；确认模板的质量及浓度；适度提高缺失（或低产）条带对应的引物用量；确保预混体系已混匀彻底；

• 存在非特异性扩增：检查单对引物的扩增性能与特异性；检查酶用量是否过多，酌情减少酶的用量；降低模板使用量；

• 电泳时条带模糊：检查引物是否出现质量问题，比如降解；减少起始模板量；降低电泳电压，更换新的电泳缓冲液；