PH0208 | PHYGENE 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（Agarose Gel DNA Extraction Kit）

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时去除蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp–40 kb大小的片段，回收率大于80%（<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率为30－50 %）。每个吸附柱每次最多可吸附的DNA量约为20 μg。

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
 
● 产品特点：

1. 溶胶液PN为亮黄色，便于观察胶是否彻底融化和溶胶体系的pH是否合适。

2. 操作快捷，单个样品操作少于15分钟。

如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。

2. 向胶块中加入3倍体积溶胶液PN （如果凝胶重为100mg，其体积可视为100 ul，则加入300 ul溶胶液），55℃水浴放置10分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。

注意： 
a) 如果此时溶胶液变为粉红色，请加入少量3M NaAc pH5.2（一般说来，10μl足矣），使溶胶液变为黄色再上柱离心。 
b) 对于高浓度的凝胶（>2％），按照100mg凝胶加入100μl灭菌水和600μl溶胶液PN的比例加入溶胶液PN。 
c) 胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。

3. 当目的片段<500bp时，如想提高回收效率，向溶胶体系种加入1/3溶胶液PN体积的异丙醇（如使用300μl溶胶液，则加入100μl异丙醇），混匀，55℃温浴1分钟后再进行步骤4。当目的片段>500bp时，省略此步骤，直接进行步骤4。

4. 将上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中（吸附柱放入收集管中），室温放置2分钟，13,000 rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

注意： 
a) 吸附柱CA1的有效容积为700μl，如溶胶体系体积大于700μl，分次上柱，保证全部溶液都加到吸附柱中。 
b) <100bp和>10kb的片段请在室温放置10分钟，这将会提高回收效率。

5. 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm离心60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。

6. 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW，13,000 rpm离心30-60秒，倒掉废液。

7. 将离心吸附柱CA1放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液。

注意：此步必不可少！如果漂洗液有残留会影响回收效率和DNA质量，进而影响下游实验；离心后将吸附柱盖子打开，室温放置2分钟，这样将有助于彻底挥发残余乙醇。

8. 将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB（一般不要少于30μl），室温放置2分钟。13,000 rpm离心1分钟收集DNA溶液。

注意： 
a) 可将洗脱缓冲液EB预热到70℃后再加到吸附膜上，这样可以提高洗脱效率。 
b) CA1柱的洗脱体积不应少于30 μl，体积过小将会降低回收效率。 
c) 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率

9. DNA产物-20℃保存。

1. 电泳时最好换用新鲜的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果；如有可能，尽量使用TAE系统，因为有研究指出使用TBE系统后，回收产物中的痕量硼酸会影响后续的酶切反应。

2. 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤；请尽量去除不含目的片段的琼脂糖凝胶，这将会对融胶很有帮助。

3. 第一次使用前请按照标签说明在漂洗液PW中加入无水乙醇，并做好标记，用完后紧拧瓶盖。