RainDrop数字PCR仪(Raindrop digital PCR System)
美国RainDance公司最新推出的RainDrop数字PCR仪,该系统还可以将来自每种标记单一颜色(single-color-per-marker)方法的现有数字PCR(dPCR)模式转换成探针强度不同的两种颜色,从而实现10个标记的多重分析。
优势
ü 超高的灵敏度:
能够检出250,000个野生型分子中的1个突变,检测极限低至1/1,000,000。
ü 最高可实现10重PCR分析:
仅利用VIC和FAM两种荧光素,设置不同探针浓度可以对同一样品进行最高达10重PCR检测。
ü 灵活的反应设计:
根据您的灵敏度和待测基因数目需要来优化多重PCR反应的数量。
ü 闭管设计:
PCR反应结束后,扩增产物不开盖检测,无需担心气溶胶污染,确保检测质量。
ü 成熟的皮液滴技术平台:
RainDrop?系统能够在半小时内高效均一地制备高达1000万个皮升大小的液滴。
ü 成本最低:
可以对每个待测基因待测位点给出数字答案,实现单分子绝对定量,且每一美元产生的数据要高出同类产品几个数量级。
操作流程简便高效
RainDrop的Source系统可以在30min时间里制备1000万个皮升大小的液滴;Sense可以在3.5 hours时间里将全部液滴进行荧光检测。研究者需要做的只需要将PCR master mix 配好,其余步骤只需要将样品在不同仪器之间切换,无需更多操作步骤。
?xml:namespace>?xml:namespace> 精确的结果实现绝对定量
RainDrop系统将每种标记单一颜色(single-color-per-marker)的PCR模式转换成更加扩展且精确的每种标记多色且多强度(multi-multicolor and intensity-per-marker)的方法。这种新方法检测1000万个皮升大小的液滴内单分子PCR产物荧光信号,比现有方法灵敏度提高了500-10,000倍。通过统计荧光信号类型、强度和液滴数量,研究人员可快速确定包含特定DNA目标的液滴的绝对数量,计算出不同待测基因的起始含量。
出色的灵敏度
为了评估EGFR突变的检测下限(LLOD),研究者将野生型DNA与不同浓度的突变体DNA进行混合,进行突变位点检测。在10,000,000个液滴中,其中250,000个野生型分子中混入1个突变基因都能够被检测到,稀释浓度与稀释次数成线性关系(R2 = 0.998),其LLOD为1/1,000,000,这是根据突变体比野生型比率的平均值加3倍标准偏差所计算出来的。
前所未有的多重分析dPCR
通过调整每个目的基因的探针浓度,Raindrop技术只用VIC和FAM两个荧光基团即可同时测定4个突变以及野生型基因,下图是进行5重PCR分析检测的分析图。通过调整反应条件,多重分析最高可以扩充到10重,快速而有效地进行单个DNA样品中多个突变的检测、鉴定和测定。