罗氏地高辛(DIG) 非放射性核酸标记检测系统

• 地高辛应用领域：

地高辛系统能够安全高效地标记DNA, RNA或是寡聚核苷酸探针，这些探针可以被广泛地应用在

èSouthern blotting, dot blotting

èNorthern blotting

èArray

èColony hybridization

èIn situ hybridization

èELISA

• 技术细节：

DIG 通过一个含有11个碳原子的空间臂与尿嘧啶核苷酸上的C5位置相连（如下图），一定浓度的DIG标记的核苷酸可以通过DNA polymerase (如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端转移酶（Terminal Transferase）的作用掺入到核苷酸探针中；也可通过随即引物标记（random primed labeling）, 缺口平移（nick translation），PCR，3’端标记/加尾或是体外转录制备带有DIG标记的探针。当然也可以通过化学合成的方法进行核苷酸的标记。

  对于DIG 标记探针的杂交检测，可选用连接有碱性磷酸酶（alkaline phosphatase），过氧化物酶(peroxidase),荧光素（fluorescein）,若丹明（rhodamine）或是胶体金（colloidal gold）高亲和性的抗DIG抗体共轭物；也可选用不带任何共轭连接的抗DIG抗体和二级抗体。

 检测的灵敏度主要依赖于对不同抗DIG抗体共轭物显示方法的选择。以连接有碱性磷酸酶的抗DIG 抗体为例：即可以使用NBT或BCIP做底物的显色法，也可以使用HNPP荧光碱性磷酸酶底物，检测的灵敏度常规可达到0.1pg (Souther blot)。