血液总RNA提取试剂盒（12230）

BiOstic? Blood Total RNA Isolation Kit专门设计用于提取2ml新鲜全血或100万个细胞的高纯度RNA。使用简单的红细胞低渗裂解液获取白细胞沉淀，提取RNA无需苯酚或超离心。试剂盒提供的RNase-free DNase I可于提取过程中在离心柱上完成DNA消化，节省事后处理时间。纯净的最终RNA可直接用于RT-PCR、qRT-PCR、cDNA合成、RNA扩增等下游应用。

BiOstic? 0020研磨和机械剪切基因组DNA，降低溶液粘稠度和RNA绑定条件下的绑定亲和力。为了完全去除基因组DNA，试剂盒提供了离心柱式RNase-Free DNase I，然后用冲洗缓冲液一次过去除酶和消化了的DNA。纯净的最终RNA可直接用于下游酶反应，无需进一步处理。

离心柱堵塞

每样细胞数超过10million或2ml 血液，或白细胞裂解缓冲液BR2使用量不当会堵塞离心柱。

提取袖套细胞前先做细胞计数。

• 提取非人血DNA，对应体积的裂解缓冲液只加入一半量的血样。

• 全血血样的白细胞计数偏高时，缩减加样血量。

• 为预防离心管堵塞，增加涡旋振荡时间2-3min可剪切大分子基因组DNA，降低粘性。

• 加样到离心柱吸附核酸时，离心时间从30s增加到2min。

   

  凝胶电泳RNA降解

  BR2缓冲液含有高离序液盐能完全灭活RNases。加入的β巯基乙醇能破坏RNases，应该新鲜制备使用。若RNA仍出现降解，可能是以下原因引起的：

• 若新鲜采集的血液未能及时处理，请4℃保存。室温放置或者-20℃保存都会导致RNA严重降解。

• 在提取RNA前根据样品数量加入适当β巯基乙醇制备BR2溶液。不能把β巯基乙醇加入到整瓶溶液中。

• 在非变性凝胶中电泳，RNA产生二次构造会出现脏带，请参阅英文说明书14页。

• A260/280比例是RNA质量的参考指标。RNA降解成小片段和单练会提高260吸光值。高于2.3的比值表明RNA有降解。

  RNA中基因组DNA污染

  BiOstic? Blood Total RNAIsolation Kit提供了高质量的RNase-Free DNaseI在离心柱上完成DNA消化。使用本试剂盒中的BR5溶液可发挥DNase I最大活力。

• 只使用试剂盒提供的缓冲液完成DNase I离心柱消化DNA。

• 保证15min的消化时间。缩短消化时间会影响基因组DNA的去除。孵育过程中RNA不会被降解。你可以把消化时间延长至30min。

• 对基因组DNA研磨能减少其在离心柱上的残留。SolutionBR2步骤充分涡旋可确保DNA剪切完全。

   

  RNA浓缩

  最终RNA溶液体积为50μl-100μl。若后续应用需要浓度更高的RNA，加入5μl 3M 冰醋酸，混匀。然后加入2倍体积的冷100%乙醇，-70℃孵育15min，或-20℃ 2h~过夜孵育。4℃ 10000g离心10-15min。弃去上清，用真空离心蒸发器、干燥器或冷干机除去残余乙醇。请避免沉淀过分风干。使用适当体积的RNase-Free water（Solution BR7）重悬沉淀的RNA。