E1010L2101 HiPuri Beads全血基因组DNA提取磁珠试剂盒操作流程
首次使用前:
1、在Binding Buffer(③)中加入指定量(见瓶身标签)的异丙醇(分析纯),并于“口”内打上“√”,混匀后室温下密闭保存。
2、在Washing Buffer I (④)中加入指定量(见瓶身标签)的无水乙醇(分析纯),并于“口”内打上“√”,混匀后室温下密闭保存。
3、在Washing BufferⅡ(⑤)中加入指定量(见瓶身标签)的无水乙醇(分析纯),并于“口”内打上“√”,混匀后室温下密闭保存。
准备工作
1、1.5mL离心管:2个/样品
2、单通道移液器:20μL、200μL、1000μL
3、漩涡振荡器
4、垂直混合仪
5、恒温水浴锅/金属浴:55℃
操作步骤:
1、裂解
取一个新的1.5mL离心管,加入200μL的抗凝血液样品(不足200μL时可用PBS或Elution Buffer(⑥)补足),再分别加入10μL的Proteinase K Solution (⑦)和230μL的Lysis Buffer (②),以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡10s后,置于55℃条件下反应5min。
2、结合
加入320μL的在Binding Buffer(③)(检查是否已加入异丙醇)和20μL的HiPuri Beads(①),以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡10min(或漩涡震荡10s后置于垂直混合仪上反应10min)。然后将离心管置于磁性分离器上放置2min,用移液器去上清液并取下离心管。
注:此步骤的磁性分离时间应不少于2min。
3、洗涤
(1)加入600μL Washing Buffer I (④)(检查是否已加入无水乙醇),漩涡震荡1min或用移液器缓慢吹打磁珠20次,使磁珠20次,使磁珠充分重悬,再将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器去上滑液并取下离心管。重复该步骤一次。
(2)加入600μL Washing BufferⅡ(⑤)(检查是否已加入无水乙醇),漩涡震荡1min或用移液器缓慢吹打磁珠20次,使磁珠充分重悬,再于室温下静置1min后,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液。
注:步骤(2)应尽量除尽洗涤液。
4、干燥
保持离心管于磁性分离器上,于室温下静置10min后,取下离心管。
5、洗脱
加入100~200μL Elution Buffer (⑥),用移液器缓慢吹打磁珠50次,使磁珠充分重悬。然后于55℃条件下加热5min,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,转移上清液至新的离心管中,此即为纯化得到的基因组DNA,可保存于-20℃。