可用于150次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。
产品说明
GeneTran II是一种新型的脂质体和多聚物转染试剂，可用于各种真核细胞系的质粒转染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染，如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和较低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞（sf9, sf21, High-Five）。有无血清存在(0-20％)对转染试剂的效果无影响。
主要特点
n 高效转染各种贴壁细胞。
n 对胚胎干细胞和原代细胞有较高的转染效率。
n 对悬浮细胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆虫细胞也有很高的转染效率。
n 在同类产品中具有更高的转染效率和更低的毒性。
n 有无血清存在(0-20％)对转染试剂的效果无影响。
n 可用于单个质粒或多个质粒共转。
n 转染24-72小时后，有高的蛋白表达量。
n 性价比高
n 操作简便
保存条件
GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存18个月。使用之前请先将试剂瞬时离心。
质粒转染步骤
以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染，请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞，质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可只按1:1混合。有时优化条件也是必须的（参见质粒DNA转染条件的优化，第7页）。
A. 转染贴壁细胞（35 mm培养皿或6孔培养板）
转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。
1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：
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2.5 μg 质粒DNA
5 μL GeneTran
x μL 无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS, DPBS等）
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总体积100 μL
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* 绝对不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用枪头吹打混匀，放置于室温20-40min。
3. 将混合液加入1 μL Reagent B，混匀后，加入到细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达，请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株，请在转染24小时后按1:10传代培养。
B. 转染悬浮细胞（35 mm培养皿或6孔培养板）
转染时保证细胞超过90%的密度
1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：
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2.5 μg 质粒DNA
5 μL GeneTran
X μL 无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS, DPBS等）
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总体积100 μL
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* 绝对不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 枪头吹打混匀，放置于室温20-40分钟。
3. 将混合液加入1 μL Reagent B，混匀后，加入到细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达，请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株，请在转染24小时后按1：10传代培养
表1各种细胞培养板转染推荐用量
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培养皿/板
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表面积（cm2）
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培养液（mL）
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混合液（μL）
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质粒（μg）
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GeneTran
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10cm
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56
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10
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500
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10
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20-30 µL
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60mm
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21
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3
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150
|
3
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6-9 µL
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35mm
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8
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2
|
100
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2.5
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5-7.5 µL
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6孔
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9.5
|
2
|
100
|
2.5
|
5-7.5 µL
|
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12孔
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3.8
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1
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50
|
1
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2-3 µL
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24孔
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1.9
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0.5
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25
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0.5
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1-1.5 µL
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48孔
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0.95
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0.25
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12.5
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0.25
|
0.5-0.75 µL
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96孔
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0.32
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0.1
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5
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0.1
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0.2-0.3 µL
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质粒转染条件优化
n 前面介绍的转染步骤是针对一般比较好转的细胞。
n 对于C2C12肌肉细胞系，FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%，而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%：
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6 μg 质粒DNA
12-18 μL GeneTran
X μL 无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS, DPBS等）
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总体积100 μL
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n 对于其他细胞系，可参考以下方法优化条件：
A． 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg，4μg和6μg。
B． 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。
C． 如果转染效率较高，但死细胞较多，可降低质粒量到1μg或更低。也可以减少孵育时间到5-24小时。
D． 可按下表优化条件：
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问题
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DNA
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GeneTran
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细胞毒性
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降到1-2 μg
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降到2-3 μL
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转染效率低
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对于难转的细胞增加到4μg
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增加到>1:4
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对于特别难转的细胞增加到6μg
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增加到>1:4
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