产品描述
MSCgo?间质干细胞成脂诱导分化培养基试剂盒，不含血清，无异源，适用于不同来源的MSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织；hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT
成脂结果
倒置显微镜观测到脂滴累积形成球形细胞，表明hMSC分化成脂。使用不同的hMSC（细胞类型、年龄、代数）得到的分化细胞数量也不一样。
试剂盒组成
MSCgo?间质干细胞成脂诱导分化培养基试剂盒
产品描述 | 储存 | 货号 | 规格 |
MSCgo? Adipogenic Differentiation Basal Medium | 2-8°C | 05-330-1-1B | 100ml |
MSCgo? Adipogenic SF,XF Supplement Mix I | -20°C | 05-331-1-01 | 100μl |
MSCgo? Adipogenic SF,XF Supplement Mix II | -20°C | 05-332-1-15 | 1.5ml |
试剂配制
1 室温下解冻2个Supplement Mix。
2 将0.1ml Supplement Mix I与 1.5ml Supplement Mix II 加入到100ml Adipogenic Basal Medium 中，于2-8°C储存。
3 完全培养基可在2-8°C储存一个月。
所需材料
BI： 05-330-1 ，05-331-1，05-332-1
? MSC NutriStem? XF : BI；05-200-1，05-201-1
? MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1
? 可选： Oil Red O，Sigma；O0625
成脂诱导分化操作
接种hMSC
1 用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem? XF，接种6x104 细胞 (3x104 cells/cm2)。注意：若使用其他培养器皿，请适当调整体积。
2 置于37°C，5% CO2 培养箱中培养。
分化
1 培养24h后即细胞融合度达到80-90%时，将MSC NutriStem? XF 培养基吸除，每孔加入0.5ml分化培养基。
注意：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。
2 置于37°C，5% CO2 培养箱中培养14-21天，参照以下建议的替代培养基。
根据hMSC类型的替代培养基方法
不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如，hMSC-AT需要较短的诱导期(~ 6天)，而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天诱导期。
注意：
l 对于所有不同类型的hMSC，诱导成脂后建议使用维持培养基。
l 避免将液体直接加入到脂肪细胞上，需要非常小心移液，因为脂肪细胞是脆弱的。
hMSC-AT:
一个分化周期/维持培养基
l 6-8天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液。
l 成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem? XF(05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培养基，培养3-4天。
hMSC-BM:
一个分化周期/维持培养基
l 8-12天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
l 成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem? XF (05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培养基，培养3-4天。
hMSC-CT:
至少两个分化周期/维持培养基
l 5-10天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
l 成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem? XF (05-200-1，05-201-1)替代分化培养基，培养3-6天，每2-4天换液。
l 重复培养周期直到观测到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成）。
Oil red-O 染色分析 （可选）
Oil red-O 用于染色脂滴。
Oil red-O 染色储存液制备
l 将0.35g Oil Red-O (Sigma；O0625) 溶解到100ml 99%异丙醇中。
l 用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如：Minisart SRP 17575)过滤。
l 溶液置于2-8°C储存一年。
Oil red-O 染色工作液制备
l 将6ml Oil red-O 染色工作液与4ml 蒸馏水混合。
l 混合均匀，室温下静置10-20 分钟。
l 用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如：Minisart SRP 17575)过滤。
l 2-3 小时内使用。
Oil red-O 染色过程
l 吸除培养基，用DPBS洗一次（1ml/well）
l 固定：吸除DPBS，每孔加入1ml 10% 福尔马林（4% 甲醛）。室温固定30-60分钟。
l 吸除福尔马林，用1ml 60%的异丙醇洗涤2-3分钟。
l 吸除异丙醇，每孔加入1ml Oil red-O 染色工作液。
l 室温静置10-30分钟。
l 用1ml 蒸馏水洗涤，去除多余的染料。
l 置于显微镜下观察成脂染色效果及图像采集。
半定量Oil red-O 染色 （可选）
l 每孔用0.5ml 100%异丙醇洗涤染料。
l 室温下静置1小时。
l 确定所有Oil red-O溶解在溶液中。
l 500nm 测OD值（100% 异丙醇作为空白对照）。
