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HS Taq DNA聚合酶（250U）

产品组分

P1081

HS^TM Taq DNA聚合酶  5 U/μl                       50 μl

10×HS^TM PCR缓冲液（Mg²⁺ Plus）                   1.25 ml

6×上样缓冲液                                     1 ml

P1082

HS^TM Taq DNA聚合酶  5 U/μl                       100 μl

10×HS^TM PCR缓冲液（Mg²⁺ Plus）                   1.25ml

6×上样缓冲液                                     1 ml

P1083

HS^TM Taq DNA聚合酶  5 U/μl                     200 μl

10×HS^TM PCR缓冲液（Mg²⁺Plus）                 1.25 ml×2

6×上样缓冲液                                   1 ml

P1084

HS^TM Taq DNA聚合酶  5 U/μl                      100 μl×36

6×HS^TM PCR Buffer （Mg²⁺Plus）                 1.25×36ml

注：1 HS^TM Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装，可自由选择，如没特别说明提供5 U/μl的包装。

2  10×PCR 缓冲液分为Mg²⁺ Plus与Mg²⁺ Free两种包装，可方便选择。如没特别说明提供Mg²⁺ Plus缓冲液。Mg²⁺Free的       10×PCR 缓冲液提供25 mM MgCl₂。
3  P1084不包含6×Loading Buffer,如有需要请单独购买。

保存条件

-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。

产品说明

HS^TM Taq DNA聚合酶（High Specificity Taq DNA polymerase）是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高，易产生非特异性条带的情况，专门研制的高特异性嗜

热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良，使得引物与模板的特异性结合力显著增强，从而提高引物与模板结合的严谨性，减少非

特异性扩增。实验数据证明。 HS^TM TaqDNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性，降低背景，又能对长片段有较高的扩增效率。

产品特点

• 热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min。
• PCR产物具有3’-dA，可直接用于T/A克隆。
• 扩增特异性高。

HS Taq DNA聚合酶（250U）

产品用途

• 常规PCR扩增
• DNA标记
• DNA测序
• 制备TA克隆用PCR产物

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，

扩增活性无明显改变。

10×PCR缓冲液

500 mM KCl

100 mM Tris-Cl

15 mM MgCl₂

1% Triton-100

酶贮存液

20mM Tris-HCl

1mM DTT

0.1mM EDTA

100mM KCl

50 % Glycerol

1% Triton-100

应用举例

注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

以λDNA为模板，扩增1kb片段。

λ DNA（2.5 ng/μl）　　　　　　　　    1 μl

引物1 （10 μM） 　　　　　　　   　   2 μl

引物2 （10 μM）　　　　　　　　 　   2 μl

10×PCR 缓冲液 　　　　　　                5 μl

dNTP混合物（2.5 mM）           　   　     4 μl

HS^TM Taq（5 U/μl）   　　　　　       0.25 μl

超纯水       　　　　　　　          补足至50 μl

PCR反应条件

95℃           3 min

95℃           30 sec

55~68℃     30 sec  〕  30 Cycles

72℃            1 min

72℃          10 min

注意事项

1 HS^TM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3’末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。

2   碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HS^TM Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10^-5。

3   建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

4  模板DNA推荐用量（50 μl 标准PCR体系）

人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg

λDNA                 0.5 ng---5 ng

质粒DNA             0.1 ng-10 ng

大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng

5  如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的Taq酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。

问：如何利用HS^TM Taq DNA聚合酶进行加A反应？

答：由高保真DNA 聚合酶（如Pfu）产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl；

加入1μl HS^TM Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液（含MgCl₂）；

加入dATP 至终浓度0.2 mM；

加入5 U的HS^TM Taq DNA 聚合酶；

加超纯水至终反应体积为10μl；

70℃孵育15-30 分钟；

进行TA克隆。