FS Taq DNA聚合酶(250U)
产品用途
常规PCR扩增
DNA标记
DNA测序
制备TA克隆用PCR产物
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
FS Taq DNA聚合酶(250U)
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,
扩增活性无明显改变。
应用举例
注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
以λDNA为模板,扩增1kb片段。
λ DNA(2.5 ng/μl) 1μl
引物1 (10 μM) 2 μl
引物2 (10 μM) 2 μl
10×PCR Buffer 5 μl
dNTPs(2.5 mM) 2 μl
Taq(5 U/μl) 0.25-0.5 μl
超纯水 补足至50 μl
PCR反应条件
多数模板的快速扩增条件
94℃ 4 min
94℃ 30 sec
55~68℃ 30 sec 30 Cycles
72℃ 20 sec
72℃ 2 min
1kb简单模板的快速扩增条件
95℃ 3min
95℃ 15 sec
55~68℃ 15 sec 30 Cycles
72℃ 20 sec
72℃ 2 min
注:由于1 kb简单模板的二级结构简单,且长度较短,可同时缩短变性、退火时间至15 s,以实现快速扩增。
注意事项
1 使用本产品时,引物、模板、dNTP用量跟普通Taq酶的一样,为实现快速扩增,请尽量选用小体反应体系。
2 退火温度一般为TM-5℃或TM-8℃,稍低的退火温度有利于实现快速扩增。
3 延伸时间视片段长度而定。一般情况,≤500 bp目的片段延伸15 s;500 bp-1 kb目的片段延伸20 s;>1 kb目的片段,延伸时间 按 20s/kb计算,如1.5 kb目的片段延伸30 s、3 kb目的片段延伸60 s。
4 FSTM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上一个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
5 建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
6 50μl PCR反应体系中模板DNA推荐用量
人类基因组DNA 0.1μg------1μg
λDNA 0.5ng--------5ng
质粒DNA 0.1ng------10ng
大肠杆菌DNA 10ng-----100ng
Q&A
问:使用FSTM Taq DNA聚合酶扩增时是否需要使用快速PCR扩增仪?
答:不需要,使用普通的PCR扩增仪即可。
问:FSTM Taq DNA聚合酶 的使用与普通Taq DNA聚合酶 有何不同?
答:使用方法与普通TaqDNA聚合酶基本相同,只需注意扩增条件中时间适当缩短。
问:FSTM Taq DNA聚合酶扩增产物是否可用于TA克隆?
答:FSTM Taq DNA 聚合酶 没有3-5外切酶活性,所以PCR产物末端带 A,可进行TA克隆。