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RT-kit（逆转录试剂盒）（20次）
货号 规格 价格
R1011 20次 600
R1012 100次 2500
试剂盒组成：
组分 | R1011（20T） | R1012（100T） |
M-MLV（200 U/μl） | 20 μl | 100 μl |
Rnase Ihibitor(40 U/μl) | 12 μl | 60 μl |
Oligo(dT)15 (50 μM) | 20 μl | 100 μl |
Random primer(50 μM) | 20 μl | 100 μl |
5×first-strand buffer | 80 μl | 400 μl |
Rnase-free ddH2O | 1 ml | 1 ml×5 |
dNTPs（10 mM each） | 50 μl | 250μl |
产品说明
RT-PCR Kit(逆转录试剂盒）是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的、具有高灵敏度的PT-PCR反应系统。该系统合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分，优化的体系保证了M-MLV具有高效的逆转录酶活性，所得cDNA对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，可用于检测稀有基因的表达、从极少数细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA片段等。
适用范围
第一链cDNA合成
cDNA文库构建
一步法RT-PCR
引物延伸
3，和5，RACE
保存条件
试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。酶在-20℃可保存1年以上，在0℃可保存3天。
操作步骤:
1. 在冰浴的无菌离心管中加入
1-5 μg总RNA或250-500 ng mRNA，
1 μl Oligo(dt)15 或Random primer，
补Rnase-free ddH2O至12.4 μl；
2. 进行变性退火反应
70oC温浴5 min, 简短离心后冰浴5 min；
3. 依次加入
4 μl 5×first-strand buffer，
1 μl dNTPs（10 mM each），
1 μl M-MLV，
0.6 μl Rnase Ihibitor；
4. 按下列条件进行反转录反应
42 oC 温浴60 min （随即引物25 oC 温浴10 min ，37 oC 温浴60 min）；
5. 终止反应
70oC 温浴5 min终止反应,置冰上进行后续实验或-20 oC 保存。
6. 用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50 μl，取2-5 μl进行PCR扩增反应。
注意事项
1 用于cDNA 合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤
除菌处理。
2 使用简单的RNA纯化方法即可获得满足于RT-PCR反应的RNA，但为了保证实验的成功率，建议使用GTC法（异硫氰酸胍法）制备的高纯度RNA。
3 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存，酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放入-20℃保存。
4 为防止RNA降解，应尽量避免反复冻融，有条件的实验室最好保存于-70℃。
5 最佳的PCR反应条件，因PCR扩增仪的不同而不同，所以在使用您的样品之前最好先试做一下control反应，以确定最佳的PCR反应条件。
6 cDNA 产物应置于-20℃保存。
