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SYBR Green qPCR Mix 1 ml（100次，20 μl体系/次）
Mix是2×浓缩的实时定量PCR扩增的预混合溶液，含有Hotstart Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液、SYBR Green Ⅰ等扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Corbett、Bio-Rad和Roche。
Hotstart Taq DNA聚合酶采用了基于核酸适配子 (aptamer) 的抑制剂，不仅使用方便，而且减少了引物二聚体和其他次级产物对反应的干扰。这种基于核酸适配子的抑制剂能够与聚合酶发生可逆结合，当温度低于 45℃ 时强抑制聚合酶活性，因而能够在室温下建立反应。在72℃时TaqDNA聚合酶即能被激活，无需另外的高温温育步骤。采用这种双重热启动Taq DNA聚合酶进行PCR扩增，能够获得更高的扩增效率、特异性。
应用举例-------------------------------------------------------------------------------------------------
反应体系
样本溶液 ＜100ng
Primer 1（10 μM） 0.4μl
Primer 2（10 μM） 0.4 μl
2×SYBR Green qPCR Mix 10μl
超纯水 补足至20 μl
如果溶解曲线出现杂峰，可以减少Mix用量
特异性反应体系
样本溶液 ＜100ng
Primer 1（10 μM） 0.4μl
Primer 2（10 μM） 0.4 μl
2×SYBR Green qPCR Mix 8μl
超纯水 补足至20 μl
如果对痕量模板的检出率低，可以增加Mix用量
高灵敏反应体系
样本溶液 ＜100ng
Primer 1（10 μM） 0.4μl
Primer 2（10 μM） 0.4 μl
2×SYBR Green qPCR Mix 12μl
超纯水 补足至20 μl
反应条件（三部法）
94℃ 3min
95℃ 15s
60 ℃ 15s
72℃ 20s
×40Cycles（data collection）
*Aptamer在60℃时会抑制酶活性，72℃完全释放酶活性，东盛推荐三步扩增程序，不建议两步法扩增。
注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------
1.将SYBR Green qPCR Mix设定为总反应体积的1/2，其他的反应组分请参照 最优条件进行调整。 最优条件确定后，如需改变反应体系总体积，各个组分按相同比例改变。
2.引物最佳终浓度为0.2-0.6 μM。引物浓度越高，扩增效率越高，但添加量过高则可能引起非特异的扩增而导致实验失败。
3.在进行反应体系配置时，通常除待检样品之外的组份预混成n+x倍（n为样品数，x为分注损耗）的混合液，然后分注到各管，最后在每管中分别加入相应的待检样品液。
4.Aptamer在60℃时会抑制酶活性，72℃完全释放酶活性，东盛推荐三步扩增程序, 不建议两步法扩增。
5.本产品依赖温度激活DNA聚合酶，低温时抑制酶活性，高温时激活酶活性, 均在极短时间完成。每一步PCR都会有低温抑制高温激活的效果，所以特异性更好。不需要PCR反应前95℃ 10min加热激活，使酶活下降，影响PCR扩增效率、定量精度。Aptamer是合成的化学物质，与Taq抗体hotstart法相比不会引入外源DNA污染。
6.模板的添加量通常在100ng以下，不同来源的DNA，最好进行梯度稀释，确定最佳模板量。
